Métodos De Determinação De Lipídios

1. INTRODUÇÃO

Os lipídios são definidos como componentes do alimento que são insolúveis em água e solúveis em solventes orgânicos, tais como éter etílico, petróleo, acetona, clorofórmio, benzeno e alcoóis. A insolubilidade dos lipídios em água torna possível sua separação das proteínas, carboidratos e da água nos tecidos. Como os lipídios têm uma grande faixa de relativa hidrofobicidade, é praticamente inviável a utilização de um único solvente universal para a extração dos lipídios. Solventes apolares extraem a fração lipídica neutra que incluem ácidos graxos livres, mono, di e triglicerídeos e alguns mais polares como fosfolipídios, glicolipídios e esfingolipídios.

A escolha do solvente vai depender dos componentes lipídicos existentes no alimento. A extração com solvente é mais eficiente quando o alimento é seco antes da análise, pois existe maior penetração do solvente na amostra. Pode-se utilizar a amostra que foi usada na determinação de umidade.

A preparação da amostra para determinação de gordura deve ser cuidadosa de maneira a evitar a sua degradação. Em muitos alimentos processados, como em produtos derivados do leite, pão, produtos fermentados, açucarados e produtos animais, a maior parte dos lipídeos está ligada a proteínas e carboidratos, e a extração direta com solventes não polares é ineficiente. Estes alimentos precisam ser preparados para a extração de gordura por hidrólise ácida ou básica, ou outros métodos. É necessário um controle também da temperatura e do tempo de exposição do material no solvente.

2. MÉTODOS DE DETERMINAÇÃO DE LIPÍDIOS

1. Extração com solvente à quente

2. Extração com solvente à frio

3. Extração por hidrólise ácida ou alcalina

1. EXTRAÇÃO COM SOLVENTE À QUENTE

É método gravimétrico (determinação feita através do peso), onde a gordura é extraída por solvente, que posteriormente é evaporado e então, pesa-se o resíduo gorduroso.

Baseado em três etapas:

A. Extração da gordura da amostra com solvente.

B. Eliminação do solvente por evaporação.

C. A gordura extraída é quantificada por pesagem.

Geralmente os solventes utilizados são o éter de petróleo e o éter etílico.

Os tipos de equipamentos: Soxhletque utiliza o refluxo do solvente e o processo é intermitente ou Goldfish, onde o processo de extração é contínuo e mais rápido.

Soxhlet:

• É um extrator que utiliza refluxo de solvente.

• O processo de extração á intermitente.

• Pode ser utilizado somente com amostras sólidas.

• Tem a vantagem de evitar a temperatura alta de ebulição do solvente, pois a amostra não fica em contato com o solvente muito quente, evitando assim a decomposição da gordura da amostra.

• A quantidade de solvente é maior porque o volume total tem que ser suficiente para atingir o sifão do equipamento.

• Tem a desvantagem da possível saturação do solvente que permanece em contato com a amostra antes de ser sifonado, o que dificulta a extração.

PROCEDIMENTO:

1. Pesar em balança analítica em torno de 2 a 5g de amostra dessecada em um cartucho de Soxhlet previamente preparado com papel filtro e algodão (anotar o peso). Pesar e anotar o peso do balão.

2. Preencher o cartucho com algodão, até cobrir toda a amostra. Manipular o cartucho e o algodão com uma pinça (ou com luvas).

3. Secar em estufa a 105°C, por 2 horas.

4. Pegar com tenaz um balão de fundo chato previamente seco a 105°C por no má¬ximo 2h e resfriado em dissecador por 20-30min, e pesar.

5. Colocar o cartucho dentro do extrator de Soxhlet

6. Conectar o extrator de Soxhlet ao balão e adicionar 250 ml de éter depetróleo.

7. Conectar o conjunto ao condensador.

8. Ligar a chapa aquecedora e manter em aquecimento por longo perí¬odo (ideal 8 horas após iní¬cio da fervura, com velocidade de gotejamento de 4 a 5 gotas por segundo).

9. Retirar o conjunto cuidando para remover o máximo de éter do balão antes.

10. Colocar o balão na estufa a 105°C, por 1h.

11. Resfriar em dissecador e pesar o balão.

CÁLCULOS

LIPÍDIOS (%) = PL x 100_

P

PL = Peso do balão com gordura – Peso do balão

P = peso da amostra

Goldfish

• É um método que também utiliza refluxo de solvente para extração.

• O processo de extração é contínuo e, portanto mais rápido.

• Pode ser utilizado somente com amostras sólidas.

• Tem a desvantagem do contato do solvente muito quente com a amostra, o que pode acarretar degradação da gordura.

• Tem a vantagem de utilizar menos solvente e ser mais rápido, pois o método sendo contínuo fazcom que a amostra esteja permanentemente em contato com o solvente.

2. EXTRAÇÃO COM SOLVENTE À FRIO

Método de Bligh- Dyer

Esse método é utilizado para todos os alimentos líquidos, pescados e carnes. Utiliza a mistura de três solventes, clorofórmio-metanol-água.

PROCEDIMENTO:

1. A amostra émisturada com o metanol e clorofórmio que estão numa proporção que formam uma só fasecom a amostra.

2. .Adiciona-se mais clorofórmio e água promovendo a formação de duas fasesdistintas, uma de clorofórmio, contendo lipídios, e outra metanol mais água, contendosubstâncias não lipídicas.