Albumina

Dentro dos vários métodos conhecidos, o método usado neste trabalho laboratorial para determinação do conteúdo proteico de uma dada amostra foi o Método de Lowry. Este baseia-se na mudança de cor da amostra após 2 processos/reações:

1 – Reação do Biureto

O método baseia-se na reação do reativo do biureto, que é constituído por uma mistura de cobre e hidróxido de sódio que estabiliza o cobre em solução, sendo o tartarato de sódio o recomendado (foi também o usado neste trabalho prático). O cobre, em meio alcalino, reage com proteínas formando então um complexo corado.

2 – Reação com o Reagente de Folin-Ciocalteau

O complexo Cobre II – Proteína formado na 1a fase reduz o reagente de Folin obtendo assim um composto com comprimento de onda (λ) de absorção entre os 405 e os 750nm o que permite traçarmos

espectros de absorvância e transmitância e também a sua quantificação pois, neste método, a intensidade da cor é proporcional ao conteúdo proteico na amostra em aminoácidos cromogénicos e ao número de ligações peptídicas, quantidade esta expressa pelo pico no espectro.

A esta capacidade de deslocar o pico de absorção máximo para outra região de comprimentos de ondas mais elevados do que os originais da substância chamamos de efeito batocrómico, ou seja, aumentamos a intensidade de absorção.

Sabemos que a maior vantagem deste método é a alta sensibilidade que é a capacidade do método em distinguir, com determinado nível de confiança, duas concentrações próximas o que faz com que seja o escolhido muitas vezes na quantificação de proteínas totais em diferentes meios.

Este método tem, no entanto algumas desvantagens: estar sujeito a muitos interferentes, apresentar longo tempo de análise, possuir absortividade específica altamente variável para diferentes proteínas, e seguir a Lei de Beer-Lambert apenas numa pequena faixa de concentração de proteínas.

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Traçar um espectro de absorvância ponto a ponto da albumina (espectrofotometria UV/VIS) e pesquisar os fundamentos

Este método requer também o uso de um padrão muito similar ao que queremos quantificar e, por esse motivo, usámos um padrão de BSA (soro bovino) pois a albumina é o seu maior componente.