Determinação de Proteinas Totais e Albumina

INTRODUÇÃO

A proteína é uma macromolécula formada por pequenas moléculas (menor parte divisível de uma substância) de aminoácido, ela é formada por no mínimo três aminoácidos. As proteínas são de extrema importância para o nosso organismo por sua função construtora e reparadora. Elas também participam da formação de hormônios, enzimas e anticorpos. Quando ingerimos proteínas, elas são quebradas durante o processo de digestão, e posteriormente, absorvidas pelas nossas células, que novamente as quebram, transformando-as em aminoácidos. Estes aminoácidos serão utilizados pelo nosso corpo onde eles forem mais necessários.

Métodos para dosagem de proteínas do sangue são utilizados para auxiliar o médico a diagnosticar patogenias e disfunções no homem. No teste de Proteínas Totais, existe um método chamado de Reação de Biureto, onde os íons de cobre, em meio alcalino (reagente de Biureto) reagem com as ligações peptídicas das proteínas séricas formando cor púrpura, que tem absorbância máxima em 545 nm, proporcional à concentração das proteínas na amostra. A reação de Biureto é uma das reações mais simples e exatas para determinação de proteínas em líquidos biológicos.

A proteína de transporte albumina, tem a propriedade de se ligar à uma grande variedade de ânions orgânicos e moléculas complexas de corantes. Os métodos utilizados para dosagem de albumina se baseiam em ligação com corantes. Esta ligação promove um desvio no pico de absortividade do corante, permitindo que a cor resultante possa ser medida colorimetricamente na presença do excesso de corante. O verde de bromocresol é o corante mais utilizado para dosagem de albumina, este corante possui especificidade para albumina e não sofre interferência de valores elevados da bilirrubina e hemoglobina, permitindo também que a interferência de valores elevados dos triglicérides possa ser corrigido usando o branco da amostra.

DESENVOLVIMENTO

Objetivos

Determinação colorimétrica das Proteínas Totais em amostras de sangue e determinação da albumina em amostras de soro.

Materiais

Os materiais que se enquadram são:

- Amostra de soro.

- Pipetas automáticas.

- Reagente Biureto.

- Reagente de cor para albumina (verde de bromocresol).

- Padrão de proteínas totais.

- Padrão de albumina.

- Espectrofotômetro.

- Tubos de ensaio.

Metodologia

Proteínas Totais:

- Três tubos de ensaio:

Branco Teste Padrão

Amostra ------------------------- 0,06ml -------------------------

Padrão 4g/dL ------------------------- ------------------------- 0,06ml

Reagente Biureto 3,0ml 3,0ml 3,0ml

H20 0,06ml ------------------------- -------------------------