Numero Mais Provável (NMP) Da Contagem De Coliformes Totais, Termotolerantes E Escherichia Coli

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

ENGENHARIA DE ALIMENTOS

Relatório de Microbiologia de Alimentos:

Numero mais provável (NMP) da contagem de coliformes totais, termotolerantes e Escherichia Coli

Alunas: Alinny Godoy da Silva

Andressa de Sousa Lício

Ariane Nogueira Saldanha

Cássia de Siqueira Nunes

Professora: Iolanda Nunes

Goiânia

Novembro, 2012

INTRODUÇÃO

O leite é um excelente meio de cultura para os microrganismos devido a suas características intrínsecas, como alta atividade de água, pH próximo ao neutro e riqueza em nutrientes. A contaminação do leite pode ocorrer durante a ordenha, porém as principais fontes de contaminação são os equipamentos utilizados durante a manipulação, o transporte, o processamento e o armazenamento, e esse será o alimento de estudo deste relatório. [2]

A análise microbiológica de um produto alimentício pode ser conduzida para investigar a presença ou a ausência de microrganismos nesse produto, para quantificar os microrganismos presentes e para identificar e caracterizar as diferentes espécies microbianas. Inúmeros métodos laboratoriais de análise podem ser utilizados em cada uma dessas determinações. Portanto, iremos determinar o número mais provável de coliformes totais e coliformes fecais presentes no leite. [2]

O grupo dos coliformes totais inclui as bactérias na forma de bastonetes Gram Negativos, não esporogênicos, aeróbios ou anaeróbios facultativos, capazes de fermentar a lactose com produção de gás, em 24 a 48 horas a 35°C. Sua presença em alimentos processados é considerada uma indicação útil de contaminação pós-sanitização ou pós-processo (principalmente no caso da pasteurização), evidenciando práticas de higiene e sanificação aquém dos padrões requeridos para o processamento de alimentos. [1]

O grupo de coliformes fecais são capazes de fermentar a lactose com produção de gás, em 24h a 44,5 – 45,5°C. O grupo dos coliformes fecais inclui pelo menos três gêneros, Escherichia, Enterobacter e Klebsiella, dos quais dois (Enterobacter e Klebsiella) incluem cepas de origem não fecal. Por esse motivo, a presença de coliformes fecais em alimentos é menos representativa, como indicação de contaminação fecal, do que a enumeração direta de E.coli, porém, muito mais significativa do que a presença de coliformes totais, dada a alta incidência de E.coli dentro do grupo fecal. [1]

Na técnica empregada do Número Mais Provável, o leite, após a homogeneização, é submetido a pelo menos três diluições decimais seriadas. De cada uma dessas diluições, alíquotas iguais são transferidas para três ou para cinco tubos contendo o meio de cultura escolhido e um tubo coletor de gás (tubo de Durhan). Todos os tubos são incubados, e, em seguida, os positivos são identificados. No caso de coliformes e E.coli, positividade significa turvação do meio com produção e confirmação da presença de S.aureus por plaqueamento em meios adequados. Pelo número de tubos positivos em cada uma das diluições empregadas determina-se o Número Mais Provável por grama de produto, tendo como base a tabela estatística de Hoskins para três ou para cinco tubos.A estimativa do número de E.coli pela técnica convencional dos tubos múltiplos pode durar até cinco dias para se completar. [2]

Neste trabalho iremos determinar a presença de coliformes totais e fecais no leite através da técnica do Número Mais Provável.

MATERIAIS E MÉTODOS

Contagem de coliformes totais, termotolerantes e Escherichia Coli pelo método do número mais provável (NMP)

Materiais:

o Diluente: 225mL de Água Peptonada 0,1%;

o Tubos de diluição: 3 a 5 com 9mL de água peptonada/tubo;

o Pipetas;

Teste presuntivo

o Meio de cultura: 9 tubos com 6-8mL de Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) com tubos de Durhan;

o Estufa incubadora regulada a 35ºC;

Contagem de Coliformes Totais

o Meio de cultura: 9 tubos com 6-8mL de Caldo verde Brilhante Bile com tubos de Durhan;

Contagem de Coliformes Termotolerantes

o Meio de cultura: 9 tubos com 6-8mL de Caldo Escherichia Coli (EC) com tubos de Durhan;

o Cepa padrão positiva: cultura de E.aerogenes com 24 horas;

o Cepa padrão negativa: cultura de E.aerogenes com 24 horas;

o Banho Maria de temperatura regulada a 45ºC;

Contagem de Escherichia Coli

o Placas de Ágar Eosina Azul de Metileno (BEM);

o Tubos de Ágar padrão para contagem (PCA inclinado);

o Tubos com 4 mL de Caldo Citrato de Koser ou Ágar Citrato de Simonns;

o Tubos com 4mL de Caldo Triptona 1%

o Tubos com 4 mL de Caldo VM-VP

o Reagente de Kovacs para teste de indol;

o Solução de Vermelho de Metila para teste de VM;

o Reagentes de Barrit para teste de VP( solução de alfa-naftol 5%, solução de KOH 40% cratina em cristal)

Métodos

Esquema de análise de alimentos em geral pelo método de NMP segue descrito na figura 01 e 02, onde a metodologia é da Americam Public Health Association.