Relatório De Aula Prática De Micologia

Relatório de aula prática de Micologia

Introdução

Os fungos são muito diversificados, eles são de grande interesse prático e cientifico, são encontrados em vários substratos sendo que a maioria vive no solo fazendo a reciclagem dos materiais da natureza, água, solo e ar; eles se dispersam através dos esporos que entram em contato com várias vias de dispersão, isso depende da umidade e temperatura.

Os fungos que se dispersão no ar são os anemófilos e tem grande importância, pois causam alergias nos homens e são agentes deteriorantes de diversos materiais.

Os fungos podem ser identificados tanto em análise macro e microscópica, na analise microscópica é feita o isolamento do fungo, os resultados apresentam varias características morfológicas.

Na análise microscópica pode se utilizar coloração de gram, todos os fungos são gram positivos, assim a coloração não diferencia, mais possibilita discriminar elementos fúngicos de um determinado tipo de amostra. É usada também a coloração de lactofenol azul algodão que tem como finalidade facilitar a visualização do micélio vegetativo e reprodutor de um fungo filamentoso e as características das células vegetativas e reprodução por brotamento de leveduras.

A seguir veremos mais sobre determinados tipos de fungos, suas características e identificação.

Materiais

* Alça de platina

* Álcool 70%

* Álcool absoluto

* Becker

* Bico de Bunsen

* Caneta Estereográfica

* Cristal Violeta

* EPI’s básicos

* Estante para tubos

* Estante/suporte para lâminas

* Estufa 37°C

* Fucsina

* Isqueiro

* Lactofenol azul algodão

* Lâmina e lamínula

* Lugol

* Microscópio

* Óleo de imersão

* Papel absorvente

* Placa com Cândida albicans em agar Sabouraud a temperatura de 37° C

* Placa com Cândida albicans em agar Sabouraud em temperatura ambiente

* Placa com Malassezia furfur em meio Mycosel

* Placas com Agar estéril

* Pregador de Madeira

Procedimentos

* Coleta

Leveduras: Placa anteriormente semeadas e cultivadas em temperatura ambiente e em estufa.

Anemófilos: Realizou-se a coleta de fungos do ar, sendo a placa exposta por 15 minutos em uma área aberta e mantida a temperatura ambiente.

* Isolamento

Inicialmente, a placa de Petri foi aberta dentro do raio de esterilização do Bico de Bunsen para evitar contaminação das colônias. Com o auxílio da alça de platina em anel foi retirada uma amostra das colônias e realizado o procedimento de coloração (Gram e Lactofenol azul de algodão), devidamente identificados, com o mesmo meio de cultura utilizado na placa (para a análise microscópica). É importante ressaltar que, antes e depois de cada procedimento, a alça de platina deve ser flambada na chama do Bico de Bunsen.

* Analise macroscópica:

Os estudos macroscópicos devem ser baseados nas seguintes características: tamanho, bordas, textura, relevo e pigmentação.

Frente: Tipo de colônia de fungo (filamentoso ou leveduriforme); textura (algodonosa, aveludada, pulverulenta, glabra, cremosa, etc.); relevo (cerebriforme, rugoso, crateriforme, apiculado, liso); coloração, bordas (regulares ou irregulares).

Verso: Fendas ou dobras – presença ou ausência. Coloração e pigmento difusível no meio de cultura-presença ou ausência.

* Analise microscópica: Técnicas de coloração

Técnica: Coloração com Lactofenol azul de algodão

1. Colocar uma gota de Lactofenol azul de algodão sobre a lâmina.

2. Retirar uma alíquota da cultura de levedura, utilizando alça ou fio de platina.

3. Colocar a alíquota de levedura sobre a gota de Lactofenol e homogeneizar.

4. Cobrir com lamínula e examinar ao microscópio nas objetivas de 10 e 40 vezes.

Técnica: Coloração de Gram

1. Cobrir toda a lâmina com solução cristal violeta (corante roxo), aguardar um minuto;

2. Desprezar o excesso de violeta

3. Cobrir a lâmina com solução de lugol (mordente) por um minuto;

4. Lavar com água corrente

5. Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto (cerca de 15 segundos). Lavar a lâmina rapidamente com água corrente.

6. Cobrir com fucsina de gram e aguardar 30 segundos;

7. Lavar a lâmina em água corrente e secar (sem esfregar);

8. Colocar uma gota de óleo de imersão sobre a lâmia e observar em objetiva de imersão (100 X).

Resultados

Analise macroscópica:

* Cândida albicans em meio Agar Sabouraud crescimento a temperatura ambiente.

Frente: