Relatório De Bioquimica

Materiais

Para medir o efeito da concentração de substrato foram utilizados os seguintes materiais:

• Enzima invertase (0,1mg proteína/mL)

• Tampão acetato 0,05M; pH4,7

• Sacarose 0,01M; 0,02M; 0,05M; 0,1M; 0,2M

• Reativo ADNS ( ácido 3,5-dinitrossalicílico)

• Pipetas graduadas de 1 a 10mL

• Tubos de ensaios (6)

• Banho-maria

• Espectrofotômetro

Metodologia

Para se medir o efeito da concentração do substrato, realizou-se os seguintes procedimentos:

1. Em todos os 6 tubos de ensaios foram adicionados 1mL de solução tampão acetato 0,05M e pH 4,7.

2. Após colocar a solução tampão foi pipetada água destilada nos tubos, porém no tubo controle foi adicionado 1,3mL enquanto nos outros 5 tubos o volume pipetado foi de 0,3mL.

3. Posteriormente adicionou-se diferentes concentrações de sacarose em seus respectivos tubos.

• Sacarose 0,01M (4mM) (mL) foi adicionada ao tubo 2

• Sacarose 0,02M (8mM) (mL) foi adicionado ao tubo 3

• Sacarose 0,05M (20mM) (mL) foi adicionado ao tubo 4

• Sacarose 0,1M (40mM) (mL) foi adicionado ao tubo 5

• Sacarose 0,2M (80mM) (mL) foi adicionado ao tubo 6

OBS: O tubo 1 é considerado o tubo controle, pois neste não há presença de substrato (sacarose).

4. Assim que os tubos receberam a quantidade especifica de sacarose foi pipetado em todos os tubos 0,2 mL de invertase 0,2 mg/mL (mL). ao adicionar a invertase os tubos ficaram incubados durante 5 minutos em temperatura ambiente (25°C).

5. Após a incubação foi adicionado em todos os tubos 1mL de ADNS ( ácido 3,5-dinitrossalicílico) (mL) e levado para aquecer a 100°C durante 5 minutos.