A PRÁTICA COMO COMPONENTE CURRICULAR BIOLOGIA MOLECULAR

[pic 1] LICENCIATURA EM CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

PRÁTICA COMO COMPONENTE CURRICULAR

BIOLOGIA MOLECULAR

Amanda Camelini Medeiros 0509981

ATIVIDADE

Sabe-se que a enzima de restrição BamHI corta um DNA fita dupla do seguinte modo e no seguinte sítio.

1. Quantos sítios de restrição existem nessa seqüência?

- Apenas um sítio de restrição.

b) Faça uma pesquisa sobre os tipos de cortes das enzimas de restrição. Descreva-os e classifique o corte da enzima BamHI.

- De acordo com o livro Biologia Molecular existem 3 tipos de cortes. As do tipo I clivam o DNA em sítios aleatórios que podem estar há mais de mil pares de bases da sequência de reconhecimento, e as do tipo III clivam o DNA a cerca de 25 pb da sequência de reconhecimento. Ambos os tipos se movem ao longo da molécula de DNA e utilizam energia proveniente da quebra de ATP (adenosina trifosfato) para isso. As endonucleases de restrição do tipo II, por sua vez, não requerem ATP e clivam o DNA no interior da sequência de reconhecimento em sítios específicos de restrição.

As enzimas BamHI são classificadas com o corte II.

c) O gel abaixo apresenta, na canaleta 1, um padrão de peso molecular onde as bandas representam sequências com 50bp, 80bp, 200bp e 1000pb. Suponha que o DNA acima tenha sido clivado pela enzima PvuII e represente, na canaleta 2, os fragmentos resultantes do corte.

Tem apenas um sítio de restrição na seqüência, dividindo a fita em duas partes. O fragmento menor tem 285 bases nitrogenadas, 142pb, ficando entre as marcações de 80 e 200 pb. O fragmento maior tem 415 bases nitrogenadas, 207pb, e ficam acima da marcação de 200pb.