Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular

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Centro de Ciências Biológicas e da Saúde

Departamento de Bioquímica  e Biologia Molecular

        Relatório de aula prática

DOSAGEM DE PROTEÍNAS DO LEITE PELO

MÉTODO DO BIURETO

Gabriela Viana  Siqueira – 93958        

Matheus Magro Gabriel – 93986

Introdução

Proteínas são macromoléculas biológicas constituídas por uma ou mais cadeias de aminoácidos. As proteínas estão presentes em todos os seres vivos e participam em praticamente todos os processos celulares, desempenhando um vasto conjunto de funções no organismo, como a  

Replicação de DNA, a resposta a estímulos e o transporte de moléculas.

Muitas proteínas são enzimas que catalisam reações bioquímicas vitais para o metabolismo. As proteínas têm também funções estruturais ou mecânicas, como é o caso da actina e da miosina nos músculos, e das proteínas no citoesqueleto, as quais formam um sistema de andaimes que mantém a   forma celular. Outras proteínas são importantes na sinalização celular, resposta imunitária e no ciclo celular. As proteínas diferem entre si fundamentalmente na sua sequência de aminoácidos, que é determinada pela sua sequência genética e que geralmente provoca o seu enovelamento numa estrutura tridimensional específica que determina a sua atividade.

Para quantificar proteínas são existentes vários métodos, que são dependentes de fatores como natureza da proteína, presença de interferentes, rapidez, sensibilidade, eficácia, custos de operacionalização, etc. Os métodos espectrofotométricos possuem características que os tornaram técnicas rotineiras na quantificação de proteínas. Nesta prática, será realizada a dosagem de proteínas do leite pelo método do biureto, com o objetivo de combinar íons cúpricos com as proteínas do leite (caseína, lactoalbumina, e lactoglobulina).

Materiais:

- Erlenmeyer de 100ml

- Bureta de 25ml

- Pipetas de 1, 2, 5 e 10ml

- Espectrofotômetro ou fotocolorímetro

- Papel-filtro

- Proveta de 20ml

- Funil

- Tubo de ensaio e estante para-tubos

- Cubetas de 1cm de caminho óptico

- Lenço de papel

 Reagentes:

- Leite desnatado

- Soluções padrão de proteína: 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10 mg/mL

- Ácido clorídrico a 2mL/100ml

Reagente de Biureto: 1,5 g de sulfato de cobre cristalizador, 6,0 g de tartarato duplo de sódio e potássio e 500mL de água destilada adicionados de 300mL de NaOH a 10% (p/v).

Procedimento 1:

1. Preparo da Curva de Calibração

Foram enumerados seis tudos de ensaio com 4mL do reagente de Biureto e 1 mL de uma solução padrão de proteína e um com água destilada, agitados e deixados em repouso por 15 minutos. Foram inseridos no fotocolorímetro e anotados os valores das absorvâncias

Padrão 1 – 0,037

Padrão 2 – 0,073

Padrão 3 -  0,103

Padrão 4 – 0,131

Padrão 5 – 0,163

Representadas pelo gráfico:

Procedimento 2

Quantificação das Proteínas do Leite

Preparo da Amostra 1

Foram adicionados 10mL de leite desnatado e 10mL de agua em um Erlenmeyer, e adicionados aos poucos 2,5mL de ácido clorídrico a 2% até a coagulação do leite, depois do procedimento, a amostra foi filtrada e o que ficou retido, descartado.