POP IDENTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS PATOGÊNICOS

[pic 1]	MANUAL DE PROCEDIMENTO TÉCNICO	Pag. 1/3 Data de elaboração: 20/11/2018
Título: IDENTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS PATOGÊNICOS		Código 009/18/MP
Elaboração: Francielle L. Figueredo                        Luana O. Rocha Morais Verificação: Marcelo R. Costa	Divulgação: Setor de Controle biológico e microbiológico	Substituição: Nº 01
Próxima revisão prevista para:     11/2020	Revisado por: Marcelo R. Costa Data: 20/11/2018
1. O QUE FAZER	Identificar através de testes e culturas microrganismos patogênicos como Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella, Staphylococcus aureus.
2. ONDE FAZER	Laboratório de microbiologia.
3. POR QUE FAZER	Para ver se há contaminações de microrganismos patogênicos.
4. QUEM EXECUTA	Discentes do curso de farmácia 8º período UNIFENAS
5. QUANDO FAZER	Em amostras com suspeita de contaminação ou para verificar produtos de acordo com a legislação.

INTRODUÇÃO

Microrganismos patogênicos estão por todos os lugares, e para serem identificados temos que fazer testes e culturas para identifica-los. Temos testes presuntivos e confirmativos. Cada microrganismo age de uma forma, por isso cada um tem testes específicos os chamados confirmativos.

MATERIAIS

-18 Tubos;

-9 Erlenmeyer;

- 2 Laminas;

- Caldos macConkey, BHI, TSB;

- S.S.P.T;

-Ágar Cetrimida, MacConkey, Sal Manitol, PCA, SS ou XLD;

-Soro polivalente anti-salmonella;

- Fita de oxidase;

-Reagentes para INVIC, água oxigenada;

- Plasma de coelho;

-Alça de platina;

-10 Placas de petri;

-Bico de Bunsen;

-Álcool;

-Estufa;

-Pera;

-Micropipeta.

PRECAUÇÕES

1- Estar devidamente equipado com EPIs, como jaleco de manga comprida, luvas, mascara n95, touca, sapatos fechados e roupa branca.

2- Esterilizar a bancada com álcool antes de começar e após terminar os procedimentos.

3- Fazer todo procedimento entre o 2 bicos de Bunsen.

PROCEDIMENTO

E. coli.

1-Jogar álcool na bancada e com o papel espalhar por toda área a ser utilizada.

2- Ligar os Bicos de Bunsen.

3- Diluir a amostra em S.S.P.T.

4- Pegar 10 mL da diluição e passar para o erlenmeyer contendo 90 mL de TSB e incubar a 32,5 ± 2,5°C por 18 a 24h;

5- Pegar do TSB 10 mL após as 24h, e passar para o erlenmeyer contendo 100 mL de caldo macConkey e incubar a 43±1 °C por 24 a 48h;

6- Com o auxilio de um alça de platina, previamente flambada passar uma alçada do caldo macConkey para o ágar macConkey, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24h;

7-Do ágar macConkey com o auxilio de uma alça de platina, passar um pouco do microrganismo para o TSA, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24;

8- Do TSA fazer oxidase;

9- Do meio do TSA depois que crescer os microrganismos passar para os tubos para fazer as

provas do INVIC;

10- Incubar para o crescimento;

11-Despois que houver o crescimento (turvar), adicionar os reagentes nos tubos;

12- No Vm acrescentar 5 gotas de Vermelho de Metila;

13- No Vp adicionar 12 gotas de α- naftol e 4 gotas de KOH 40%;

14- Na água peptonada acrescentar 4 a 6 gotas do Reativo de Kovac’s;

15- Observar os resultados;

16- Se for Indol e Vm positivo e Vp e citrato negativo, indicativo de Escherichia coli.

17- Desligar os bicos de Bunsen;

18- Limpar a bancada.

P.aeruginosas

1-Jogar álcool na bancada e com o papel espalhar por toda área a ser utilizada.

2- Ligar os Bicos de Bunsen.

3- Diluir a amostra em S.S.P.T.

4- Pegar 10 mL da diluição e passar para o erlenmeyer contendo 90 mL de TSB e incubar a 32,5 ± 2,5°C por 18 a 24h;

5- Pegar do TSB com o auxilio de um alça de platina, previamente flambada passar uma alçada do TSB e passar para o ágar Cetrimida, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24h;

7-Do ágar Cetrimida com o auxilio de uma alça de platina, passar um pouco do microrganismo para o TSA, incubar a 32,5±2,5°C por 18 a 24;

8- Do TSA fazer oxidase;

9- Do meio do TSA fazer coloração de gram;

10- Com o auxilio da alça de platina passar uma alçada para o caldo BHI e incubar a 41°C por 48h;

11- Desligar os bicos de Bunsen;

12- Limpar a bancada.

Salmonella

1-Jogar álcool na bancada e com o papel espalhar por toda área a ser utilizada.

2- Ligar os Bicos de Bunsen.

3- Diluir a amostra em S.S.P.T.

4- Pegar 0,1 mL da diluição e passar para o tubo contendo caldo rapapport e incubar a 32,5 ± 2,5°C por 18 a 24h;

5- Com o auxilio de um alça de platina, previamente flambada passar uma alçada do caldo rapapport para o ágar XLD ou SS, incubar a 35°C por 18 a 24h;

7-Do ágar XLD ou SS com o auxilio de uma alça de platina, passar um pouco do microrganismo para o TSA, incubar a 35°C por 24;

8- Colocar solução salina 0,9%, fazendo uma suspenção de microrganismo;

9- Pegar 0,3 mL da suspensão de M.O e passar para a placa e por o soro polivalente anti- salmonela;