Contagem De Microrganismos

RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA – CONTAGEM DE MICRORGANISMOS

Existem várias condições em que é conveniente quantificar a população microbiana de uma determinada amostra. Na análise da eficiência de agentes antimicrobianos ou a eficácia de práticas higiênco-sanitárias é comum determinar a população sobrevivente ao tratamento. Também é comum empregar técnicas para quantificar a população de microrganismos da água e alimentos para avaliar a qualidade microbiológica dos mesmos.

Alguns Conceitos: Métodos de Contagem e Diluição

Os microrganismos podem ser quantificados de forma direta, contando-se microscopicamente o número de células presentes num determinado material ou superfície, ou indiretamente, efetuando-se análises da turbidez, determinação do peso seco, concentração de substâncias químicas (proteínas, pesquisa de determinada enzima ou produto final de uma via metabólica, DNA, RNA) ou através da contagem do número de microrganismos viáveis utilizando um meio de cultura apropriado.

Contagem microscópica direta – esse método requer o uso de câmaras de contagem especiais como a de Petroff-Hauser, na qual uma alíquota de uma suspensão da cultura ou de qualquer amostra é contada e o número de células é determinado matematicamente. O método é rápido, mas não permite discriminar células vivas de células mortas. Também não é sensível o suficiente para determinação de populações inferiores a 1 milhão de células.

Contagem eletrônica – quantifica rapidamente o número de células numa suspensão, através da passagem do fluido por um orifício minúsculo contendo um fluxo de elétrons. Como as células não são condutoras, elas aumentam a resistência elétrica do fluido condutor e a resistência é registrada eletronicamente, quantificando o número de células que passam através do orifício. Esse método tem o inconveniente de detectar células mortas e também quantifica materiais inertes porventura presentes na amostra.

Análise espectrofotométrica – a turbidez de uma cultura está relacionada com a concentração de células. Quanto mais turva a cultura, maior é a concentração celular. O método turbidimétrico mede a quantidade de luz transmitida no espectrofotômetro a 600m. Quanto menor for a quantidade de luz transmitida maior é a concentração celular daquela suspensão.

Diluição - Os métodos de laboratório nos quais uma quantidade de uma substância é adicionada a outra para reduzir a concentração de uma das substâncias. Uma diluição é uma expressão de concentração, não de volume. Expressa de outra forma, uma diluição indica a quantidade relativa de substâncias em uma solução. Quando a palavra diluição é usada, ela deve significar o número de partes que foram diluídas em um número total de partes. Em outras palavras, uma diluição deve significar o volume de concentrado no volume total da solução final.

Objetivo: Quantificar os microrganismos por meio de suas unidades formadoras de colônia, presentes em um sabonete aleatório de uso na instituição pesquisada, determinando assim, se este ainda possui a eficácia esperada.

Procedimento:

Práticas laboratoriais são utilizadas comumente para contagem de microrganismos presentes em uma determinada amostra. Dentre essas práticas, utilizamos a técnica de espalhamento em superfície (spread-plate), que consiste em sucessivas diluições da amostra, e que em cada diluição é espalhada em duas placas de Petri contendo meio de cultura - TSA 0,1 ml da amostra. Também conhecido como método das diluições seriadas, este método serve tanto para o isolamento quanto para contagem de microorganismos.

Fundamentação Teórica:

Segundo a Farmacopeia Brasileira, produtos de higiene são produtos para uso externo, anti-séptico ou não, destinado ao asseio ou à desinfecção corporal. Esses produtos podem ser classificados em grau I, que são aqueles que não necessitam de comprovação de suas propriedades e não requerem informações detalhadas quanto ao seu modo de usar e suas restrições de uso, e grau II, que são os que exigem comprovação de segurança e eficácia, bem como informações e cuidados, modo e restrições de uso.

Os sabonetes são produtos de higiene pessoal e podem ser classificados em grau I ou II, de acordo com a Resolução nº 211 da ANVISA. Esta classificação indica o nível de risco de efeitos