Análise de Microbiota do Leite

Prática 1: Analise de Microbiota do Leite

Introdução:

O leite é um excelente meio de cultura para vários microrganismos. Ao ser produzido ele é estéril, mas à medida que se desloca pelos canais da glândula, em direção à cisterna, pode contaminar-se com microrganismos da microbiota, variável com cada animal, e outros que penetram pelo orifício da teta. Algumas vezes o leite pode conter microrganismos patogênicos (Salmonella, Coxiellaburnetti, Mycobacterium bovis, M, tuberculosis, Brucellaabortus) originários ou não do próprio animal. A contaminação do leite pode continuar durante a ordenha, o transporte e o armazenamento. Pessoas portadoras de infecções que participam da manipulação do produto também podem representar fonte de contaminação. As condições de transporte e/ou armazenamento também contribuem para a multiplicação dos microrganismos presentes no leite. Assim, grandes populações de microrganismos degradadores (Streptococcus, Leuconostoc, Lactococcus, Lactobacillus, Pseudomonas, Proteus) podem estar presentes no leite. Grandes populações são indicativas de que as características iniciais do leite foram modificadas pelo crescimento mcrobiano. Assim, a qualidade do leite pode ser avaliada em função de sua microbiota, fornecendo informações que refletem as condições sob as quais o alimento foi produzido, beneficiado e/ou mantido (refrigeração e armazenamento inadequado).

        Vários procedimentos são utilizados para a avaliação da qualidade do leite, Alguns adotam conhecimentos práticos (teste da fervura e teste do álcool 70°), outros empregam a atividade enzimática (teste da redutase) e há ainda os que avaliam o tamanho da microbiota (contagem em placa) ou a presença de grupos de microrganismos (coliformes, salmonelas).

Objetivos:

• Avaliar a qualidade dos leites M e G;
• Conhecer os princípios das técnicas de fervura, álcool 70º;
• Realizar o procedimento de inoculação por estrias;
• Avaliar a qualidade do leite em função do número de microrganismos presentes.

Material Utilizado

• Amostras de leites (M e G)
• Béqueres de 50 mL
• Alça de platina
• Tubos de ensaio
• Estantes para tubos
• Álcool 70º
• Fósforo
• Lamparina
• Álcool 96º para desinfecção das bancadas
• Papel absorvente
• Filme PVC
• Pipetas pasteur
• Placas de petri contendo meio de cultura: ágar nutriente
• Pinça de madeira

Método

TESTE DA FERVURA

        O teste da fervura é o mais prático e rotineiro de todos. Ele baseia-se no fato de que o aquecimento reduz o pH. Se um leite apresenta-se bastante alterado (pH baixo), embora com aspecto físico normal, ele coagulará ao se aquecido, pois o pH baixa ainda mais.

Procedimento:

- Colocar 5 mL de leite em um tubo de ensaio;

- Ferver;

- Observar se há ou não coagulação (leite alterado ou normal respectivamente).

TESTE DO ÁLCOOL

        O princípio deste teste é semelhante ao anterior, só que mais sensível. Além disso, ele é particularmente útil na identificação de animais portadores de infecções (Streptococcus) sem manifestações clínicas. Animais infectados levam à coagulação do leite, neste teste, que pode aparecer rapidamente ou demorar de quatro a seis horas, quando as alterações são pequenas.

Procedimento:

- Colocar 5 mL de leite em um tubo de ensaio;

- Adicionar 5 mL de álcool 70°

- Observar se há ou não coagulação (leite alterado ou normal respectivamente).

CONTAGEM DE BACTÉRIAS

        Utilizar para esta técnica, duas placas contendo meio de cultura – Ágar Nutriente, previamente esterilizado, adicionado às placas estéreis e solidificado. Com uma alça de platina, flambar, esperar esfriar, tocar o leite M e inocular na superfície do meio de cultura através de estrias, flambar novamente a alça de platina. O procedimento deve ser realizado dentro da zona asséptica a fim de evitar contaminações. Repetir o processo para o leite G. Incubar à temperatura ambiente por dois dias. Após crescimento, proceder análise e contagem;

Resultados

As amostras de leite, M e G apresentaram coagulações, em ambos os testes, porém no teste com o álcool 70° isso ficou mais evidente, principalmente no leite M.

Discussão

Conclusão

Referência Bibliográfica

SILVA FILHO, G. N.; OLIVEIRA, V.L. Microbiologia: Manual de aulas práticas. Editora UFSC, Florianópolis, 2004.

Prática 02: Análise da microbiota de ambientes

Introdução:

Os microrganismos são encontrados nos mais diversos ambientes, podendo estar em suspensão ou depositados com a poeira em várias superfícies, entre elas a pele e as mucosas do homem. O meio aquático foi, provavelmente, o ambiente primordial para os mais diversos microrganismos, os quais se diversificaram e colonizaram outros ambientes. Nas partículas de poeira, os microrganismos estão presentes em grandes quantidades e, portanto, são passíveis de entrar no nosso organismo através de diversos mecanismos. Os microrganismos presentes no ar depositam-se na superfície de nosso corpo, cabelos, pele e mucosas, bem como nos alimentos e bebidas.