BIOQUÍMICA - DOSAGEM DE UREIA NO SORO

ASSOCIAÇÃO EDUCATIVA DO BRASIL - SOEBRAS

FACULDADES UNIDAS DO NORTE DE MINAS - FUNORTE

CURSO DE GRADUAÇÃO EM BIOMEDICINA

DISCIPLINA: BIOQUÍMICA CLÍNICA I

APOSTILA DE PRÁTICAS - BIOQUÍMICA

ALANA RODRIGUES FROES

DAMIANY THAIS SOUZA

DANIELE PEREIRA DE SÁ

JENIFFER DA SILVA GOMES

MONTES CLAROS – MG

2016

SUMÁRIO

PRÁTICA 01 – PERFIL LIPÍDICO .......................………....….................................... 3

PRÁTICA 02 – DOSAGEM DE URÉIA NO SORO….….....….....................................3

PRÁTICA 01 – PERFIL LIPÍDICO

1.1. INTRODUÇÃO

        O exame de colesterol total é também chamado painel lipídico, ele mostra os níveis de colesterol e triglicérides na corrente sanguínea. Este exame ajuda a determinar riscos de obstrução das artérias por formação de placas de gorduras (aterosclerose). Altos níveis de colesterol geralmente não apresentam sintomas, por isso é importante fazer a dosagem regularmente.

        Já o exame de colesterol HDL é muito importante para detectar se está em quantidades adequadas, pois concentrações baixas do HDL inferiores a 40 mg/dl, aumentam o risco de doença cardiovascular, por outro lado, acredita-se que o HDL remove o excesso de colesterol da placa aterosclerótica, retardando ou inibindo a sua formação, além de transportar o colesterol de volta para o fígado, onde é novamente metabolizado, por isso a importância de se possuir o colesterol HDL em maiores quantidades.

        E os Triglicerídeos ou Triglicérides, são a reserva de energia do corpo humano. Eles têm a função de fornecer “combustível” para os músculos. Quando os triglicérides não são usados como forma de energia, passam a ser armazenados no tecido adiposo, como gordura. A dosagem dos triglicerídeos é de extrema importância, pois em altas quantidades (hipertrigliceridemia), estão relacionados a um maior risco cardiovascular, obesidade, esteatose hepática (gordura no fígado) e pancreatite, dentre outros.

1.2 OBJETIVO

        Fazer a dosagem e determinação do colesterol total, colesterol HDL e triglicerídeos, em amostra de soro utilizando o método enzimático colorimétrico. E comparar os resultados com os valores de referências e com os resultados dos demais colegas.

1.3 MATERIAIS E REAGENTES

        Para a realização da prática na dosagem do colesterol total, utilizou-se o soro do paciente em teste, reagente nº1 (reagente enzimático), reagente nº2 (padrão), espectrofotômetro, micropipetas, tubos de ensaios, estante para tubos de ensaio e banho-maria (37 ºC).

        Na dosagem do HDL, utilizou-se novamente o soro do paciente em teste, o reagente nº1 (padrão), o reagente nº2 (reagente precipitante), espectrofotômetro, micropipetas, tubos de ensaios, estante para tubos de ensaio e banho-maria (37 ºC).

        E para a dosagem dos Triglicerídeos, utilizou-se o soro do paciente em teste, reagente nº1 (reagente enzimático), reagente nº2 (padrão), espectrofotômetro, micropipetas, tubos de ensaios, estante para tubos de ensaio e banho-maria (37 ºC).

1.4 PROCEDIMENTOS 

        Para o procedimento da dosagem do Colesterol Total, marcou-se três tubos de ensaio, com, as seguintes letras: B (Branco), A (Amostra) e P (Padrão), logo depois adicionou-se 2 mL do reagente nº1 em cada um dos três tubos, depois 10 μl do reagente nº 2 somente no tubo de ensaio identificado como P (padrão), após isso, adicionou-se 10 μl da amostra no tubo identificado como A (amostra), homogenizou-se bem cada um e levou-se para o banho-maria a 37ºC por 10 minutos, depois leu-se a absorbância da Amostra e do Padrão em 500nm, acertando-se o zero com o branco.

        Na dosagem do Colesterol HDL, utilizou-se os seguintes métodos: para a precipitação das VLDL, LDL e quilomícrons, num tubo de centrífuga, pipetou-se 250 μl, do soro do paciente e 250 μl, do reagente nº2 (reagente precipitante), logo depois agitou-se manualmente durante 1 minuto e centrifugou-se a 3500 rpm durante 15 minutos, depois da centrifugação, pipetou-se imediatamente o sobrenadante, para evitar resultados falsamente elevados resultado falsamente elevado. Na determinação do Colesterol HDL, marcou-se três tubos de ensaio: B (Branco), A (Amostra), P (Padrão), após isso, adicionou-se 2mL do reagente enzimático em cada um dos três tubos, logo depois adicionou-se 50 μl no tubo identificado como P (padrão) e 50 μl, no tubo identificado como A (amostra). Homogenizou-se bem e colocou-se em banho-maria 37ºC por 5 minutos. Leu-se então a absorbância da Amostra e do Padrão em 500 nm, acertou-se o zero com o Branco.

        E para a dosagem dos Triglicerídeos, marcou-se três tubos de ensaio, com, as seguintes letras: B (Branco), A (Amostra) e P (Padrão), logo depois adicionou-se 2 mL do reagente nº1 em cada um dos três tubos, depois 10 μl do reagente nº 2 somente no tubo de ensaio identificado como P (padrão), após isso, adicionou-se 10 μl da amostra no tubo identificado como A (amostra), homogenizou-se bem cada um e levou-se para o banho-maria a 37ºC por 10 minutos, depois leu-se a absorbância da Amostra e do Padrão em 500nm, acertando-se o zero com o branco.

1.5 RESULTADOS E DISCUSSÃO

        Pode-se observar que a cor ficou estável nos três tubos por 30 minutos tanto para a dosagem do colesterol total, do colestrol HDL e dos triglicerídeos, e apresentou uma cor rosa nos três tubos ao serem retirados do banho-maria. Os valores obtidos na absorbância foram:

	Absorbância Colesterol Total	Absorbância Colesterol HDL	Absorbância Triglicerídeos
Branco	0,065	0,046	0,027
Amostra	0,304	0,026	0,011
Padrão	0,278	0,011	0,091

Cálculos

Colesterol Total (mg/dL) = 0,304 x 200                                            ------------------- = 218,71 mg/dl                                                    0,278 Colesterol HDL (mg/dL) = 0,026 x 80                                         ------------------- = 189,09 mg/dl                                                  0,011 Triglicérides (mg/dL) = 0,011 x 100                                      -------------------- = 12,09 mg/dl                                              0,091