Bactérias gram positiva e gram negativa

1. INTRODUÇÃO

O meio de cultura necessário para o crescimento in vitro dos microrganismos interfere em seu desenvolvimento, tais como a temperatura e oxigênio. Quando este meio de cultura é favorável ao microrganismo este inicia seu desenvolvimento, passando pelas diversas fases da curva de crescimento: latência, logarítmica, estacionaria de declínio ou morte. Cada espécie apresenta um tipo morfológico colonial diferente, as colônias são analisadas quanto ao formato, tamanho, elevação, pigmentação e bordas. Cultura pura é aquela que ao ser observada apresenta um único tipo de colônia, diferente da cultura mista que vários tipos de colônias são observados. (HOFLING, GONÇALVES, 2008).

Semeadura em meio líquido; a inoculação é feito em um meio líquido de Brain Hearth Infusion.

Semeadura em meio sólido inclinado ou em placa; Inocula a bactéria em meio nutriente ágar(NA), fazendo estrias na superfície do ágar com alça de platina (esgotamento simples), poderá ser dividido em duas, três ou quatro partes.

Semeadura em um meio semi-sólido em tubo (Picagem Profunda); Inocula a bactéria em um meio semi-sólido, utilizando agulha de platina. (HOFLING, GONÇALVES, 2008).

Semeadura em meio sólido em placa (técnica de esgotamento-STREAK).

A técnica de esgotamento em placa (streak) consiste em depositar sobre um ponto da superfície do meio uma parte do material e depois espalhá-lo em dois ou três setores, por meio da alça de platina. Sem recarrega-la, de maneira a obter quantidades progressivamente menores do material. Deve-se obter rarefação do material, de modo a formar colônias perfeitamente isoladas. (HOFLING, GONÇALVES, 2008).

Semeadura em placa (POUR-PLATE).

A técnica pode ser empregada com objetivo de obter colônias isoladas (estudo qualitativo) ou de realizar a contagem em placa (estudo quantitativo).

Esterilização é o processo de inativação total, por meio de agentes físicos e químicos de todas as formas de vida quanto à sua capacidade reprodutiva. Desinfecção atua na inativação ou redução dos microrganismos presentes em um material, mas não elimina todos os microrganismos viáveis porém elimina o potencial de infecção do objeto, superfície ou local. Assepsia é semelhante à desinfecção, porém está relacionada com substâncias aplicadas ao organismo humano. (HOFLING, GONÇALVES, 2008).

Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus

Taxonomia

Reino: Bacteria

Filo: Firmicutes

Classe: Bacili

Ordem: Bacilldes

Família: Staphylococcaceae

Gênero: Staphylococcus

Espécie: S. Saprophyticus

Escherichia coli

Taxonomia

Reino: Bacteria

Filo: Proteobacteria

Classe: Gammaproteobacteria

Ordem: Enterobacterides

Família: Enterobacteriaceae

Gênero: Escherichia

Espécie: E. coli

2. OBJETIVO

Desenvolver habilidades para executar as técnicas de preparação de esfregaços para o método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as à composição química da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Observando no microscópio óptico as bactérias após a coloração de Gram.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 MATERIAIS

Alça de platina

Álcool-acetona

Bico de Bunsen

Corante violeta

Fucsina

Lâminas

Lugol

Microscópio óptico

Óleo de imersão

Placa de meio de cultura Cled geleia

Tubos que já estão com meio de cultura liquida

3.2 MÉTODOS

O fio e a alça de platina foram flambados antes e depois de qualquer inoculação, ao rubro no cone interno da chama do bico de Bunsen;

Para a coleta do material a alça de platina foi esfriada na parte interna do recipiente com o meio de cultura; (tubos de ensaio, placas de Petri, etc.) com meio de cultura devem ser abertos próximos ao bico de Bunsen;

A boca dos tubo de ensaio foi aquecida antes da retirada e antes da colocação da tampa. A tampa nunca deve ser colocada sobre o balcão, sendo retirada e mantida segura pelo dedo mínimo da mão durante a inoculação, não se deve falar perto.

Preparou-se um esfregaço em lâminas das culturas bacterianas fornecidas, secando o esfregaço próximo à chama;

Agitar a lâmina e depois colocar sobre a pia;

Cobrir o esfregaço com corante violeta e deixe por 1 minuto;

Escorrer o corante e cobrir com lugol e deixar por 1 minuto;

O corante escorreu e adicionou álcool-acetona, descorando a lâmina até que não desprendeu mais corante;

Cobriu-se com fucsina e deixou por 30 segundos;

Escorreu e secou ao ar livre sobre papel filtro observou-se em objetiva de imersão;

________________

4. RESULTADOS

A coloração de Gram é um método de coloração de bactérias desenvolvido por Hans Christian Joachim Gram,