COLORAÇAO DE GRAM

Introdução

O método tintorial predominante utilizado em bacteriologia é o método de Gram. Essa técnica é simples, rápida e tem capacidade de resolução, permitindo o correto diagnóstico em cerca de 80% dos pacientes em caráter de pronto atendimento em nível local. Os custos com investimento e manutenção são consideravelmente baixos diante da eficácia alcançada com os resultados imediatos dos testes. Essa técnica requer instalação simples, necessitando apenas de uma sala pequena com disponibilidade de água e gás, onde deverá ser instalado um balcão com pia e um bico de Busen, eventualmente substituído por uma lamparina ou espiriteira. São ainda necessários: microscópio com objetiva de imersão e bateria para a coloração de Gram. Os corantes devem ser preparados pelo próprio laboratório ou por um laboratório habitado que assegure a qualidade do produto. Finalmente, e mais importante, são necessários técnicos de laboratório treinados, responsáveis e conscientes do valor do seu trabalho. A coloração de Gram recebeu este nome em homenagem a seu descobridor, o médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Em 1884, Gram observou que as bactérias adquiriram cores diferentes, quando tratadas com diferentes corantes. Isso permitiu classificá-las em dois grupos distintos: as que ficavam roxas, que foram chamadas de Gram positivas, e as que ficavam vermelhas, chamadas de Gram-negativas. Após descrição do método, inúmeras propostas de modificação foram feitas.

Objetivos

Desenvolver habilidades para executar as técnicas de preparação de esfregaços e para o método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e classificar as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as à composição química da parede celular das mesmas. Desenvolver a habilidade, também, para utilizar o microscópio óptico, observando as bactérias após a coloração de Gram.

Materias e Métodos

Materiais

Violeta de Metila

Lâmina

Lugol

Alcool Etilico

Fucsina

Método

1. Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e deixe por aproximadamente 15 segundos;

2. Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta-de-metila e deixe agir por mais 45 segundos;

3. Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído e deixe agir por aproximadamente 1 minuto;

4. Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;

5. Adicione álcool etílico sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante;

6. Lave em um filete de água corrente;

7. Cubra a lâmina com fucsina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;

8. Lave em um filete de água corrente;

9. Deixe secar ao ar livre

Resultados e Discussão

Vários pesquisadores tentaram, com pouco sucesso, determinar o mecanismo envolvido no método