Coloração De Gram

A Coloração de Gram é o método bacterioscópico direto mais importante e utilizado atualmente na microbiologia clínica. A técnica é fundamental para a taxonomia e identificação das bactérias, classificando os microrganismos com base em suas características tintoriais, tamanho, forma e arranjo celular.

As bactérias são classificadas basicamente em dois grandes grupos no que se refere à composição da parede celular: Gram-Positivas e Gram-Negativas. As Gram-Positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-Negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos.

O método da coloração de Gram é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-Positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as bactérias Gram-Negativas extraem os lipídeos, resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular. As bactérias Gram-Positivas coram-se de roxo (púrpura) e as bactérias Gram-Negativas coram-se de rosa (vermelho).

2- OBJETIVOS

- Aprender a preparar esfregaço de bactérias.

- Realizar a técnica de Coloração de Gram.

- Comparar a estrutura da parede celular das bactérias Gram-Positivas e Gram-Negativas ao microscópio.

- Permitir a observação da morfologia bacteriana e fornecer informações a respeito do comportamento do seu material celular diante dos corantes de Gram.

• Compreender a importância dessa coloração para microbiologia clínica.

• Compreender cada etapa do processo de coloração, bem como a função de cada

substância utilizada.

3- MATERIAIS

- Placa de Petri contendo crescimento bacteriano

- Lâminas para preparação do esfregaço

- Alça de platina

- Bico de Bünsen

- Bateria de corantes para o Gram

4- METODOLOGIA

Preparo dos esfregaços

- Para material em meio líquido (cultura bacteriana líquida):

• Com auxílio da alça de inoculação previamente esterilizada, colocar 2 - 3 alíquotas da amostra em uma lâmina de vidro.

• Espalhar bem sobre a superfície da lâmina, fazendo movimentos circulares.

• Flambar a alça na chama do bico de gás antes de recolocá-la em seu lugar.

- Para material em meio sólido (culturas bacterianas em placa):

• Com auxílio da alça de inoculação, previamente esterilizada, coletar uma pequena alíquota da cultura bacteriana em uma lâmina de vidro.

• Espalhar bem sobre a superfície da lâmina, fazendo movimentos circulares.

• Flambar a alça na chama do bico de gás antes de recolocá-la em seu lugar.

Fixação dos Esfregaços

• Após a secagem, fixar os esfregaços, passando as lâminas cerca de 3 vezes sobre a chama do bico de gás.

• Deixar esfriar e corar.

Coloração de Gram

As placas e o tubo de ensaio com o material a ser analisado, foram previamente preparadas pela professora Elisângela contendo Cocos Gram Positivos e Negativos e Bacilos Gram Positivos e Negativos.

Com o bico de Bünsen aceso, na proximidade da chama, utilizou-se uma alça de platina para coletar amostra e fazer o esfregaço na lâmina. Após, foi feita a fixação dos esfregaços, passando as lâminas cerca de 3 vezes sobre a chama do bico de gás.

Deixou-se esfriar e iniciou-se o processo de coração das lâminas.

Cobriu-se a lâmina com corante