Método de fixação

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Para a melhor utilização do microscópio, diversas técnicas foram formalizadas e inovações foram feitas. Corantes, fixadores, micrótomo, esfregaço, esmagamento. Esses são alguns materiais e algumas técnicas que são necessárias em um laboratório que utiliza microscopia.

As diferentes técnicas utilizadas em microscopia dependem também das finalidades laboratoriais. Por exemplo, se as lâminas forem para fins educacionais, deve-se tentar montar uma lâmina permanente, no entanto, se a lâmina for preparada para testes laboratoriais na área de saúde, como contagem de células, tal técnica deve ser descartada, seguindo as normas de biossegurança necessárias.

No microscópio eletrônico de transmissão há, em vez de luz, um feixe de elétrons que atravessa o material biológico, produzindo a imagem. Já o microscópio eletrônico de varredura por meio também de elétrons, estuda-se detalhes de superfícies de objetos sólidos. O material deve ser desidratado e recoberto com uma fina camada de metal. Com a movimentação de um feixe de elétrons, a superfície do material é captada por um sensor e então há uma interpretação computadorizada dessa superfície.

Atualmente, os aparelhos utilizados nos laboratórios de biologia de escolas e universidades são, na maioria, microscópios ópticos ou fotônicos, que utilizam luz. Eles possuem dois conjuntos de lentes de vidro ou de cristal, e geralmente fornecem ampliações de 100 a 1000 vezes. A luz, projetada através do objeto em observação, atravessa as lentes da objetiva e chega ao olho do observador. Utiliza-se então um micrômetro e um macrômetro para focalizar o objeto fracionado na lâmina estudada e o charriot para efetuar a varredura, que é a visualização dos diferentes campos de uma lâmina.

Corantes ajudam na identificação e diferenciação de componentes de células e tecidos. Esses componentes tendem a ser transparentes e os corantes dão aos observadores um meio de ver o que é invisível ao olho humano. Os corantes são mais frequentemente usados em estudos de microbiologia, histologia e citologia. Abaixo estão alguns dos corantes mais usados.

Marrom Bismarck, Carmim, Cristal violeta, Eosina,Hematoxilina e Safranina

fixação: Técnica citológica que tem por objetivo preservar o material a observar ao microscópio num estado o mais próximo possível em que foi realizada a colheita.

Na fixação são utilizados métodos para provocar a morte imediata das células, interrompendo a atividade vital num determinado momento e impedindo a autólise celular e a decomposição por ação bacteriana.

A técnica de fixação pode ser um processo físico (ex.: congelação) ou um processo químico, recorrendo-se a fixadores, diferentes para a microscopia ótica (ex.: líquido de Bouin, etanol, ácido ósmico e ácido acético) e para a microscopia eletrónica (ex.: tetróxido de ósmio, permanganato de potássio e aldeído glutárico).

Micrótomo é o aparelho que faz cortes microscópicos, variando geralmente de 1 à 10 µm (micrómetros) de espessura, em pequenas amostras de material biológico (tecidos vegetais