O Cultivo Bacteriano

Cultivo bacteriano

1. Limpar o fluxo laminar e ligar a ultravioleta – 20 min
2. Todo material que for levado ao fluxo deve ser limpo (externamente) com álcool 70%
3. Proceder o repique celular

1. Materiais a levar para o fluxo: alças microbianas, meio de cultura, caneta retroprojetor, microrganismo p/ ser usado e um descarte.
2. Nesse primeiro momento, o meio de cultivo já está pronto.
3. Esgotamento – 4 áreas.
4. Por fim, incubar células na estufa. A incubação será feita em jarra de anaerobiose juntamente com um sistema gerador de atmosfera anaeróbia (Aerobacter 16 TT- Probac) a 37oC por período de 7 – 14 dias.
5. Colocar as alças no descarte com água sanitária, por 15min para depois lavar com água e sabão e colocar para esterilizar.

- O meio utilizado é o Agar Sangue que deve ser suplementado hemina (5 μg/mL) e menadiona (1 μg/mL) (vitamina k)(Sigma).

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- Todas as colônias isoladas, de acordo com suas características macroscópicas, serão

submetidas à caracterização por afinidade tintorial pela técnica de Gram e definição de morfologia por

microscopia óptica. As colônias serão repicadas em caldo Triptose soja suplementados com hemina (5

μg/mL) e menadiona (1 μg/mL) (Sigma) e com adição de óleo mineral com objetivo de impedir a difusão

de oxigênio seguido de incubação em jarra de anaerobiose juntamente com um sistema gerador de

atmosfera anaeróbia (Aerobacter 16 TT- Probac) a 37o C por período de 7 – 14 dias após o qual as

células serão centrifugadas e estocadas em solução crioprotetora a – 80oC.

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