O Meio de Cultura e Plaqueamento

UNIFIEO

CURSO DE QUÍMICA

FUNDAMENTOS DE MICROBIOLOGIA

2º Semestre

CARACTERIZAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA, PLAQUEAMENTO E COLORAÇÃO DE GRAM

ALUNO (A):                                                                                                         QUI-NA2/G6

MARIA DE LOURDES NUNES DE OLIVEIRA                     17100582

TAMIRES SANTOS ROQUE                                                    16200140

        

Prof.: Humberto Bezerra

OSASCO

2017

Sumário

Título...........................................................................................................................................3

Objetivo.......................................................................................................................................3

Introdução...................................................................................................................................3

Procedimento..............................................................................................................................7

Resultados e Discussão.............................................................................................................10

Conclusão..................................................................................................................................14

Bibliografia...............................................................................................................................15

Título: Caracterização de Meios de cultura, Plaqueamento e Coloração de Gram.

Objetivo: Caracterizar diferentes meios de cultura, conhecer a técnica asséptica, repique por esgotamento e plaqueamento livre. Aplicar o método de coloração de Gram e identificar bactérias Gram negativas ou Gram positivas em microscópio.

Introdução:

As bactérias são conhecidas desde 1674, mas sua estrutura é ainda objeto de estudos, são micro-organismos unicelulares e procariontes. Não apresenta um núcleo definido, seu material genético é compactado e envelopado numa região chamada de nucleóide, apresentam uma membrana plasmática recoberta por uma parede celular, o seu tamanho varia entre 0,2 e 5,0 micrômetros, observáveis apenas ao microscópio óptico.

A cultura de bactérias é o crescimento de colônias induzida pelo homem para facilitar seu estudo, para a realização desta cultura precisa-se de um inoculo e um meio de cultura. O meio de cultura é uma substância líquida ou sólida, simples ou complexa, que permite a nutrição, o crescimento e a multiplicação das bactérias. O meio de cultura é selecionado de acordo com o tipo de bactéria a estudar.

MacConkey Agar:

O MacConkey II Agar é um meio diferencial seletivo utilizado para o isolamento e diferenciação de Enterobacteriaceae e uma variedade de outros bastonetes gram-negativos provenientes de amostras clínicas. Atualmente, encontram-se disponíveis muitos meios de cultura para o isolamento, cultura e identificação de Enterobacteriaceae e determinados organismos não fermentadores. Um dos primeiros meios deste tipo a ser desenvolvido foi de autoria de MacConkey, tendo sido publicado em 1900 e 1905. Esta formulação foi concebida sabendo-se que os sais biliares são precipitados por ácidos e que determinados microrganismos entéricos fermentam a lactose ao passo que outros não têm esta capacidade. Mais tarde, este meio foi modificado várias vezes. O Agar de MacConkey é apenas ligeiramente seletivo uma vez que a concentração de sais biliares, que inibe os microrganismos gram-positivos, é reduzida relativamente a outros meios entéricos em placas. Este meio é recomendado para utilização com amostras clínicas com probabilidade de conter flora microbiana mista como, por exemplo, a urina, vias respiratórias, feridas e outras fontes, porque permite um agrupamento preliminar de bactérias entéricas e outras bactérias gram-negativas fermentadoras e não fermentadoras da lactose. O ágar de MacConkey também é utilizado no exame microbiológico dos alimentos. A formulação de MacConkey II Agar foi concebida para potenciar a inibição da proliferação da espécie Proteus, para conseguir uma diferenciação mais definitiva dos organismos fermentadores e não fermentadores da lactose e para um melhor desenvolvimento das bactérias entéricas. No MacConkey II Agar, as peptonas fornecem os nutrientes. O cristal violeta inibe as bactérias gram-positivas, especialmente os enterococos e os estafilococos. A diferenciação de microrganismos entéricos faz-se através da combinação de lactose e do indicador de pH vermelho neutro. Produzem-se colônias incolores ou de cor rosa a vermelha consoante à capacidade do isolado para fermentar o hidrato de carbono.

Fórmula* por Litro de Água Purificada:

Hidrolisado pancreático de gelatina	17 g
Hidrolisado pancreático de caseína	1,5 g
Hidrolisado péptico de tecido animal	1,5 g
Lactose	10,0 g
Sais biliares	1,5 g
Cloreto de sódio	5,0 g
Vermelho neutro	0,03 g
Cristal violeta	0,001 g
Agar	13,5 g

O MacConkey II Agar é um dos meios padrão utilizado para a colocação primária de amostras clínicas em placas e para uma variedade de materiais não clínicos. Neste meio, desenvolver-se-ão todos os organismos da família das Enterobacteriaceae e uma variedade de outros bastonetes gram-negativos como, por exemplo, as Pseudomonas e géneros relacionados. Os organismos não fermentadores ou outros bastonetes gram-negativos sensíveis aos ingredientes seletivos não se desenvolvem neste meio. Consultar os respectivos capítulos na bibliografia antes de utilizar o meio para organismos específicos. Foi referido que algumas Enterobacteriaceae e Pseudomonas aeruginosa são inibidas pelo MacConkey Agar quando incubadas numa atmosfera enriquecida com CO2. Embora possam ser realizados alguns testes de diagnóstico diretamente neste meio, é necessária a realização de testes bioquímicos para uma completa identificação e, se indicado, a realização de testes imunológicos usando culturas puras.