PROCESSOS FERMENTATIVOS ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS

UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ

ENGENHARIA DE BIOPROCESSOS E BIOTECNOLOGIA

PROCESSOS FERMENTATIVOS

ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS

Trabalho semanal apresentado ao Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia Processos Fermentativos Industriais: Fundamentos e Aplicações

Universidade Federal do Paraná.

CURITIBA, 2006

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO......................................................................................................................	3
2. ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS DO SOLO....................................................	3
2.1. TÉCNICA DE CULTURA EM PLACA..............................................................................	4
2.2. TÉCNICA DE ENRIQUECIMENTO.................................................................................. 3. ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS DO AR..........................................................	4 5
4. ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS DA ÁGUA....................................................	6
5. ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS DAS PLANTAS..........................................	6
6. PURIFICAÇÃO.....................................................................................................................	7
7. REFERÊNCIAS.....................................................................................................................	8
8. ANEXO...................................................................................................................................	9

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1. INTRODUÇÃO

O estudo de microrganismos é muitas vezes dependente da possibilidade de cultivar e manter microrganismos viáveis no laboratório, sob a forma de culturas puras. As culturas puras são constituídas por células genética e morfologicamente idênticas de um único tipo de microrganismo. Para se obter essas culturas, é necessário isolar um único microrganismo de interesse.

O isolamento de um determinado microrganismo em cultura pura geralmente é feito a partir de uma população mista (por exemplo, presente numa amostra de solo, na água, numa planta, em rochas entre outros).

O isolamento de microrganismos da natureza é o primeiro passo na procura de enzimas e metabólicos secundários. A característica do produto desejado e o processo desenvolvido para se obtê-lo são fundamentais para a escolha do microrganismo que se deve isolar e o melhor local. Geralmente a escolha do microrganismo é influenciada pela capacidade de produção, biomassa, rendimento, custos de recuperação, estabilidade do microrganismo em fermentadores de larga escala e fácil manipulação genética.

Algumas regras para isolamento são citadas abaixo e geralmente podem ser usadas no isolamento de qualquer grupo de microrganismos:

• Listar os grupos de microrganismos que serão isolados
• Descrever o ecossistema ou habitat da onde as amostras serão coletadas.
• Agrupar as amostras em tipos, ex: solos, rochas, água, insetos, etc.
• Listar os parâmetros ambientais que devem ser considerados e medidos como pH, salinidade, temperatura.
• Listar os substratos naturais disponíveis no ambiente.
• Projetar técnicas de isolamento baseado nos dados obtidos dos passos citados acima, ex: diluentes, substratos, extratos naturais e condições de incubação.
• Avaliar os métodos de isolamento utilizando os métodos padrões como controle.
• Modificar procedimentos conhecidos quando necessário.
• Empregar procedimentos específicos enriquecidos para o grupo microbiológico que é de interesse.

Os parâmetros ambientais tais como temperaturas altas ou baixas, pH alcalino ou ácido, força iônica e até concentração do substrato são de extrema importância na hora de isolar um microrganismo. Muitos destes parâmetros são medidos no campo ou no laboratório. A composição do meio também é relevante, por exemplo, no caso de isolamento de actinomicetos se utiliza substratos em baixas concentrações, por isso, são mais utilizados em ágar do que em meios ricos. Geralmente quando se tem interesse em isolar bactérias são adicionados ao meio antifúngicos, sendo possível também adicionar alguns antibióticos para deixar o meio mais seletivo.

1. ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS DO SOLO

O solo é constituído por um grande número de seres vivos microscópicos. Uma colher de chá do solo fértil de um jardim pode conter bilhões de microrganismos-bactérias, fungos, algas, protozoários e vírus. Duas palavras caracterizam a flora microbiana do solo – abundância e diversidade.

Sendo os microrganismos crucias para a manutenção da produtividade do solo, é imperativo que os pesquisadores compreendam a magnitude e a diversidade dessa população microbiana. Uma única técnica laboratorial não pode revelar a população microbiana total de uma amostra de solo. Algumas das técnicas utilizadas para o isolamento de microrganismo do solo seria a técnica de cultura em placa e técnica de enriquecimento.

2.1 Técnica de Cultura em Placa

Em geral, na técnica de cultura em placa, diluições da amostra do solo são adicionadas a tubos contendo o meio liquefeito e resfriado, e posteriormente o conteúdo desses tubos é distribuído em placas de Petri. Alternativamente, as diluições podem ser semeadas na superfície do meio solidificado em placa para permitir o desenvolvimento de colônias (Figura 1). Entretanto, somente uma parte da população microbiana total será capaz de crescer sob qualquer condição específica de cultivo.