A Extração de DNA em morango
Por: amandamaarkes • 19/6/2018 • Relatório de pesquisa • 694 Palavras (3 Páginas) • 669 Visualizações
No dia 23 de Outubro na aula de Bioquimica Aplicada as ciências agrárias foi realizado a aula prática do segundo trimestre de 2017/2 que tinha como objetivo a extração de DNA(ácidos nucleicos) apartir das células de sangue de duas espécies animais sendo elas de mamifero e ave (amostra 1 e 2 respectivamente). O procedimento apresentavam 9 etapas.
Em primeiro momento deveria adicionar 0,1 mL de sangue de cada animal em dois tubos separados com 5,0 mL de Salina devidamente identificados. O tubo 2(com amostra 2)apresentou ser mais turvo do que o tubo 1,deixando sua cor mais avermelhada e com amostra mais suspensa.Após isso, os tubos foram centrifugados por 2 minutos para que seja sedimentado todas as hemácias sanguíneas. O tubo 1 a sedimentação foi total da amostra,porém no tubo 2 algumas células romperam liberando a hemoglobina e acontecendo o que chamamos de hemólise parcial.Após fazer suas devidas anotações das observações das amostras, os sedimentos foram colocados novamente sobre suspensão e em seguida adicionado 20 µL de detergente fraco para romper a membrana citoplasmática da célula e as amostras apresentaram mais transparência.A próxima etapa solicitava a centrifugação dos tubos por 5 minutos novamente.Após o tempo permitido de sedimentação aconteceu a separação do núcleo do restante, a precipitação apresentava coloração branca . O tubo 1 apresentou quantidade de núcleo inferior comparado ao tubo 2.
Ao descartar o sobrenadante e adicionar 5,0 mL de salina e ressuspender os tubos por agitação leve foi adicionado 50µL de detergente forte para romper a membrana do núcleo, onde se encontra o DNA. A amostra 2 continuou apresentando mais viscosidade comparada a amostra 1.Para finalizar foi incubado em banho Maria por cerca de 10 minutos a 65°C,adicionado 1,5 mL de NaCl (Cloreto de Sódio) para proporcionar um ambiente favorável para a extração do DNA, o sal contribui com os íons positivos que neutralizam a carga negativa do DNA e em seguida 7,0 mL de Álcool etílico 100%, o DNA se soltou de seu núcleo e permitiu a observação a olho nu.Isso ocorre devido a proteína do DNA ser insolúvel em álcool,ou seja, ela não se dissolve em álcool, por esse motivo as moléculas se agrupam formando um monte de filamentos muito finos. A amostra 2 o DNA se apresentou maior comparado a amostra 1 devido esta amostra ter ocorrido hemólise parcial durante o procedimento.
Esse procedimento foi realizado em casa também com o objetivo de mostrar que é possível fazer a extração em outras amostras, no caso usado morangos. Os matérias utilizados para o experimento foram: detergente de cozinha, álcool etílico, sal de cozinha, 4 ou 5 morangos, água em temperatura ambiente,um saco plástico transparente , um recipiente transparente, um palito de churrasco e uma peneira.
Os procedimentos são simples, começando fazendo a lavagem dos morangos tirando os cabinhos com folhas, colocando-os dentro do saco plástico transparente e esmagando pelo lado de fora para que a fruta se desmanche como mostra a figura abaixo.
[pic 1]
Após os morangos estarem amassados, foi adicionado uma colher de chá de sal, uma de detergente e aproximadamente 125 mL de água, a amostra foi misturada e em seguida coada para um recipiente transparente.
[pic 2][pic 3]
O sal tem a mesma função do que o sal no laboratório falado anteriormente, neutralizar as cargas negativas do DNA com as cargas positivas de NaCl.O detergente afeta as membranas porque são formadas por lipídios . Com a ruptura das membranas o conteúdo celular , incluindo as proteínas do DNA se soltam e dispersam-se na solução.
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