RELATÓRIO DA EXTRAÇÃO DO DNA GENÔMICO DO MORANGO DA DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR

RELATÓRIO DA EXTRAÇÃO DO DNA GENÔMICO DO MORANGO DA DISCIPLINA DE BIOQUÍMICA E BIOLOGIA MOLECULAR I

INTRODUÇÃO

A importância de conhecer o DNA e de seu manejo correto reside no fato de esta molécula orgânica ser responsável pelas informações genéticas que constituem um indvíduo, a qual é passada de geração em geração, repeitando o dogma central da biologia, que consiste na replicação do DNA, síntese de RNA e posterior produção de proteínas. É interessante ressaltar a pureza de função assosicada ao DNA, visto que é uma das poucas macromoléculas que desempenham as mesmas funções básica em diversas espécies (DEVLIN, 472) Por isso, é possível ampliar os conceitos e resultados desta experiência para organismos humanos, para vírus e para bactérias, sendo estes conceitos de suma importância para o desenvolvimento de fármacos, como quimioterápicos, antivirais e antibióticos.

A visualização a olho nu das fitas de DNA, objetivo prático desta experiência, é atribuída ao fato de esta molécula caracterizar-se como um biopolímero, a partir da ligação de fosfodiéster entre seus monômeros, os nucleotídeos, com crescimento da cadeia no sentido 5”->3’. A conformação de dupla hélice do DNA é associada às ligações de hidrogênio entre as bordas hidrofílicas de suas bases, as quais são específicas, garantindo a relação de complementaridade às fitas, o que é essencial para a duplicação do fiel do DNA.

Enfim , para a realização da experiência, foi necessária a proteção do DNA, por meio da inativação das DNAses, lise celular com base na desagregação dos fosfoliídeos da membrana plasmática e desnaturação proteica das proteínas que compõem o citoesqueleto e purificação da molécula, por meio da desagregação do DNA às histonas e insolubilização da molécula.

2 MATERIAL E MÉTODOS

2.1 MATERIAL UTILIZADO

• Balança analítica;

• Copo plástico

• Espátula;

• Capela de exaustão

• Agitador magnético;

• Bequer de 50Ml

• Proveta de 50ml

• Frasco de vidro para armazenar soluções estoque;

• Pipeta;

• Micropipeta

• Pipetadores

• Micropipetadores;

• Centrífuga

• Microcentrífuga;

• Tubos para microcentrífuga,

• Tubos tipo falkon,

• Cadinho de porcelana e pistilo,

• Estante de microtubos,

• Banho maria;

• Vórtex.

• Morango,

• Edta

• Tris

• Sds

• Naoh

• Hcl

• Gase

• PCI

•

2.2 PREPARO DOS REAGENTES

O preparo dos reagentes consistiu no produção de soluções estoques e posterior incorporação dos reagente para a composição das soluções necessárias na concentração desejada.

Para o preparo das soluções estoque calculamos a quantidade em gramas de TRIS, EDTA, NaOH e SDS.

CALCULOS DAS SOLUÇÕES ESTOQUE

PREPARO DAS SOLUÇÕES ESTOQUE:

O preparo das soluções estoque aconteceu com o auxílio de balança de precisão, espátula, copo plástico e capela de exaustão (para a pesagem do SDS)

Para o preparo da solução de TRIS, taramos o copo plástico na balança de precisão e, com auxílio de uma espátula pesamos 0,1211g da substancia. O mesmo procedimento foi feito para o EDTA, pesando-se 0,0372g, e para o NaOH, pesando-se 0,8g. Para a pesagem do SDS fez-se necessário uso da capela de exaustão e de luvas; então, em uma balança, dentro da capela, com tara do copo plástico, pesou-se 1g de SDS.

Após a pesagem das substancias, houve a solubilização delas em água destilada (50ml). Após a incorporação de um volume de água destilada inferior a 50ml (margem de segurança) em um béquer e leve agitação manual, as três soluções foram levadas, separadamente, para o agitador magnético.

A solução de TRIS e EDTA, devido à restrição no ph (ph 8,0 para ambas), elas foram levadas, separadamente, ao phametro. À solução de TRIS, que contava com ph>8,0 foi adicionado pequena quantidade de ácido clorídrico (ácido forte) até que o ph se estabilizasse em 8,0. À solução de EDTA, em contrapartida, ph<8,0 foi adicionado solução de hidróxido de sódio, até que o ph se estabilizasse em 8,0.

Com as soluções devidamente dissolvidas e com o ph correto, o conteúdo foi transferido do béquer de 50ml para a proveta de 50ml, devido a maior precisão do equipamento. Neste momento, adicionou-se, cuidadosamente, água destilada até a correta marcação do menisco das soluções na marca de 50ml. Isso feito, as soluções estoque foram devidamente armazenas em um frasco de vidro e identificadas.

Posteriormente,