Extração e Caracterização de Enzima Uréase.

CENTRO UNIVERSITÁRIO CAMPOS DE ANDRADE - UNIANDRADE

Extração e Caracterização de Enzimas- uréase.

Relatório Nº 3, submetido às avaliações bimestrais da disciplina de Bioquímica e Biofísica, do curso de biomedicina 2ºperíodo

Bianka Dewes Steffen  nº06;

Eliton Migacz Pietczak  nº14;

Larissa Welker Costa    nº25.

Prof.ª Neuza Maria Ferraz de Mello

Gonçalves

CURITIBA

2015

 Extração e Caracterização de Enzima uréase.

1 INTRODUÇÃO

As enzimas são proteínas especializadas na catálise de reações biológicas. Praticamente todas as reações que caracterizam o metabolismo celular são catalisadas por enzimas, sendo assim, consideradas as unidades funcionais do metabolismo celular. A  enzima uréase  por sua vez tem a função de degradar a uréia gerando sub produtos como o gás carbônico  e  amoníaco. Todos os organismos decompõem ácidos nucléicos e proteínas produzindo resíduos nitrogenados, pois os ácidos nucléicos e as proteínas contêm nitrogênio. Os mamíferos, anfíbios e alguns invertebrados libertam resíduos azotados na forma de uréia, que é produzida no fígado. A uréia é um composto especialmente indicado para a eliminação de azoto, pois é solúvel em água e menos tóxica que a amônia, no qual é o produto da excreção nos peixes, por exemplo. A urina humana contém 2% de uréia.

Por isto, o referente trabalho tem como objetivo mostrar em seis diferentes métodos a atividade enzimática da uréase frente a fatores adversos (pH, temperatura etc.) nessas reações realizada no laboratório de Bioquímica durante a aula prática dos alunos do 2° período do curso de Biomedicina do Centro Universitário  Campos de Andrade – Uniandrade.

2 OBJETIVOS

2.1 Caracterizar a estrutura molecular da presente amostra.

2.2. Verificar as reações positivas para os seguintes testes: atividade, processo desnaturação pelo calor e metais pesados e pela especialidade.

3 MATERIAL E MÉTODOS

3.1 Material

3.1.1 Equipamentos

Banho-Maria fervente á 98ºC.

3.1.2 Reativos

        Solução de uréase, reativo de Biureto, água destilada, ácido nítrico concentrado, solução tampão fosfato Ph 7 com uréia, Vermelho de fenol, solução tampão fosfato (sem uréia), cloreto de mercúrio e solução tampão fosfato Ph 7 com tioureia.

3.1.3 Vidraria

        Tubos de ensaio, Becker, pipetas.

3.1.4 Acessórios.

Pêra, Pisset, estante de tubos, caneta de marcação.

3.2 Métodos

3.2.1  Teste de Caracterização da Estrutura Molecular

1 Teste de Biureto:

Adicionar 10 gotas da solução de uréase, em um tubo de ensaio e pipetar 2mL do reativo de Biureto.

2 Teste de Heller

Adicionar 10 gotas da solução de uréase, em um tubo de ensaio e pipetar 2mL de água destilada.  Acrescentar 2 mL de acido nítrico concentrado e  observar.

3.2.2 Teste de Reações Positivas para a Caracterização Enzimática.

1- Teste de Atividade Enzimática.

Em um tubo de ensaio A, pipetar 2 mL de tampão fosfato pH 7 com uréia, 2 gotas de vermelho de fenol e 2 gotas da solução de uréase.

No tubo B pipetar 2 mL de solução tampão fosfato sem uréia, 2 gotas de vermelho de fenol e 2 gotas da solução de uréase.

2 - Desnaturação pelo Calor.

Em 1 tubo de ensaio  A, adicionar 5 gotas da solução de uréase e 2 mL de água destilada e colocar para ferver em banho Maria por 5 minutos. No tubo B,  pipetar 2 mL de solução tampão fosfato pH 7 com uréia, 2 gotas de vermelho de fenol e 1 mL da solução de uréase fervida.

3 - Desnaturação por Sais de Metais Pesados.

Em um tubo de ensaio pipetar 2 mL de solução tampão fosfato pH 7 com ureia, 5 gotas de cloreto de mercúrio, 2 gotas de vermelho de fenol e 2 gotas da solução de uréase.