ROTEIRO AULA COLESTEROL

AULA PRÁTICA DE BIOQUÍMICA – Determinação do Colesterol Total

Materiais:

 KIT de bioquímica

 Micropipeta

 Tubos de Ensaio

 Ponteiras

 Béquer

 Papel Higiênico

 Aparelho de Banho-Maria

 Espectrofotômetro

Fundamento:

Éster de Colesterol – colesterol esterase* → Colesterol + AG

Colesterol + O2 – colesterol oxidase* → Colestenona-4 + H2O2

H2O2 + Fenol* + 4-Aminoantipirina* – perixidase* → Quinoneina (possui cor vermelha) + H2O

*: Reagente de cor

↑ vermelho ↑ colesterol na amostra

A quinoneina é estável para fazer a leitura até 1h;

Procedimento:

Recebe o KIT de bioquímica para determinar o colesterol. Eles veem com uma bula, que você deve segui-la. No KIT vem, o reativo de cor, que possui as enzimas* (que por possuir fenol, tem um cheiro forte e é tóxico – mas não pode cair na mão, que é agressivo a pele, por isso tem que usar luvas!) e o padrão de colesterol, é o colesterol puro, com concentração 200 mg/dL, concentração apresentada pelo fornecedor.

KIT de Bioquímica

Reagente de cor e Padrão.

Como é o procedimento: Para medir esses 2000 Microlitros, utiliza uma micropipeta, ela possui dois tempos, o primeiro tempo (que você deve já pressionar antes de por no tubo reagente de cor) dentro do tubo você solta o primeiro tempo bem devagar, para não encher de bolha – quando tem bolha, tem desnaturação enzimática, começa a dar erro na leitura. Quando tirar a micro pipete DEVE secar a ponteira.

Tubos de ensaio contendo o Reagente de cor.

Primeiro passo: Coloque reativo de cor em todos os tubos;

Segundo passo: Colocar o padrão no tubo indicado; ao colocar o padrão no reativo de cor, coloca-se o a ponteira até o final; do tubo e “lava” a ponteira com esse reativo;

Terceiro Passo: Colocar no tubo de ensaio Teste, o 20 microlitros da amostra de um paciente, contendo o colesterol;

Quarto passo: Misturar cuidadosamente, para homogeneizar a mistura – SEM a formação de bolha. Leve em banho maria, em 37 graus Celsius, por 10 minutos. Quando tirar do banho, já pode fazer a leitura;

O comprimento de onda que se utiliza é o de 500 nm.

TUBOS BRANCO PADRÃO TESTE ABS

Reativo Cor 2000 Microlitros 2000 Microlitros 2000 Microlitros -

Padrão - 20 Microlitros - 0.329

Teste - - 20