Relatório da Prática de Extração e Caracterização da Urease

Relatório da Prática de Extração e Caracterização da Urease

1. RESUMO

O presente relatório possui como objetivo descrever o processo de caracterização da enzima urease. A urease é definida como uma proteína com ação enzimática sobre a uréia, a qual, catalisa a hidrólise da uréia em amônia e dióxido de carbono.

Sabe-se que as enzimas são, em sua maioria, proteínas especializadas na catálise de reações biológicas, as quais agem em praticamente toda as reações metabólicas celulares, acelerando a sua velocidade, diminuindo sua energia de ativação sem alterar o equilíbrio das reações. Assim sendo, as ações enzimáticas são fixadas como essenciais, visto que, por meio delas, as reações bioquímicas por vias metabólicas transcorrem-se.

Palavra-chave: Urease, Enzima, Reações, Velocidade, Proteína.

2. INTRODUÇÃO

As enzimas são substâncias orgânicas fundamentais para a vida e manutenção dos processos biológicos. Em sua maioria, as enzimas são proteínas com atividades catalíticas, salvo um pequeno grupo de moléculas de RNA. (NELSON, 2014). As atividades catalíticas das enzimas dependem da integridade da sua conformação protéica nativa. Assim sendo, a desnaturação ou dissociação da enzima em subunidades resultam na destruição da atividade catalítica da enzima, evidenciando assim a importância do estrutura protéica para a concretização atividade catalítica.(NELSON, 2014).

A função das enzimas consiste na diminuição da energia de ativação da reação, aumentando, assim, a velocidade das reações, sem afetar o equilíbrio da reação. Uma parte significativa da energia utilizada no aumento da velocidade das reações proporcionada por enzimas, provém de interações fracas (ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas e iônicas) entre substrato e enzima.(NELSON, 2014).

A propriedade característica das reações catalisadas por enzimas é definida pelo local onde a reação ocorre, a qual é denominada por sítio ativo, estrutura composta por resíduos de cadeias laterais de aminoácidos que interagem com o substrato e catalisam a sua transformação química. (NELSON, 2014). As enzimas assumem atributos de especificidade, os quais selecionam os substratos que serão ou não catalisados, no sítio catalítico onde se processa a reação enzimática.

A atuação da enzima no processo de conversão do substrato não ocorre de forma direta. A reação enzimática simples pode ser descrita do seguinte modo:

E+S ⟷ ES ⟷ EP ⟷ E+P

onde onde E, S e P representam enzima, substrato e produto; ES e EP são complexos transitórios da enzima com o substrato e com o produto. Tal fenômeno é justificado pela ação da barreira energética, a qual, após ser catalisada pelas enzimas, alinha a energia necessária para que a reação ocorra de forma útil. Na ausência das enzimas a formação de produto ocorre de maneira insuficiente ou nula. Entretanto, na presença da mesma, a reação se dá de forma factual e frenética. (NELSON, 2014).

3. MATERIAIS E MÉTODOS

3.1 Materiais

Tubos de ensaio, estante para tubos, pipetas graduadas, pêra, banho de água quente, água destilada, urease, uréia 1%, tiouréia 1%, vermelho de fenol, sulfato de cobre 1% e hidróxido de sódio 2,5 M.

3.2 Métodos

3.2.1 Reação de Biureto

Adicionou-se em dois tubos de ensaio, tubo 1 e tubo branco, os seguintes compostos: 1 mL de urease e reação de biureto ( 2 gotas de NaOH + 5 gotas de CuSO4) no primeiro tubo e 1 mL de água destilada e reação de biureto ( 2 gotas de NaOH + 5 gotas de CuSO4) no tubo branco. Posteriormente ambos foram agitados.

3.2.2 Atividade da Urease

Foram adicionadas em dois tubos de ensaio, tubo 1 e tubo controle, as seguintes substâncias: 1,5 mL de uréia 1%, 0,5 mL de urease e uma gota de vermelho de fenol, respectivamente, no tubo 1 e 1,5 mL de água destilada, 0,5 mL de urease e uma gota de vermelho de fenol no tubo controle, na seguinte ordem. Subsequentemente ambos foram agitados.

3.2.3 Desnaturação da Urease pelo Calor

Foram adicionadas 2,0 mL de água destilada e 7 gotas da solução de urease em um tubo de ensaio grande. O mesmo foi agitado e deixado no banho de água quente por 5 minutos. Após o banho foram adicionados 1,5 mL de uréia 1% e 1 gota de vermelho de fenol. Posteriormente foi agitado e comparado ao teste de atividade da urease.

3.2.4 Especificidade da Urease

Foram adicionados em dois tubos de ensaio, tubo 1 e tubo 2, as seguintes substâncias: 1,5 mL de uréia 1%, 0,5 mL de urease e uma gota de vermelho de fenol no tubo 1, e 1,5 mL de tirouréia