CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO DE MEDICAMENTOS E COSMÉTICOS

CENTRO UNIVERSITÁRIO UNA

CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO DE MEDICAMENTOS E COSMÉTICOS

Fabiana Cruz Dias

José Adilson Corrêa

Lúcia Juliana dos Santos

Paula Cristina Dias

Paulo Afonso R. Leão

Rosiane Abreu

AULA PRÁTICA NÚMERO 1:

Determinação do número de contaminantes (método Pour Plate)

PROF: DRA. ELZÍRIA DE AGUIAR NUNAM

TURMA: FAR4AN-GJA

BELO HORIZONTE, 03 DE ABRIL DE 2018

INTRODUÇÃO

        De acordo com a resolução nº 481, de 23 de setembro de 1999, todos os produtos de higiene pessoal, cosméticos e perfumes devem passar por um controle de qualidade microbiológico antes de sua comercialização e, para cada tipo de produto, há critérios diferenciados dos limites que estes podem apresentar (de acordo com a sua classificação) (BRASIL, 1999).

        Para a realização deste controle, a Farmacopeia Brasileira dispõe de dois métodos: a semeadura por estriamento (spread plate) e a semeadura por plaqueamento ou incorporação (pour plate) (FB, 2010).

        A semeadura pelo método de incorporação consiste em fundir a suspensão no meio de cultura, para que os microrganismos viáveis cresçam não somente na superfície, mas também no interior do Agar. Esse método permite avaliar principalmente a ação do conservante no produto (PELCZAR, 1996).

OBJETIVOS

Avaliar o número total de microrganismos (bactérias mesófilas aeróbias e fungos) presentes em produtos tais como os cosméticos e preparações farmacêuticas não estéreis.

MATERIAL

• Amostra (Xampú)
• Pipeta graduada estéril de 10 mL
• Pipeta automática de 1000 μL
• Ponteiras estéreis
• Béqueres estéreis
• Erlenmeyer de 100 mL
• Tubos de ensaio
• Gaze estéril
• Bastão de vidro
• Álcool a 70%
• Bico de bunsen
• Placas de Petri
• Solução salina peptonada tamponada
• Agente neutralizante (Tween 80 a 3,0% + lecitina 0,3%)
• Meios de cultura (Agar caseína-soja e Agar sabouraud-dextrose).

METODOLOGIA

• Fazer a assepsia externa do frasco de xampu com álcool a 70% e gaze estéril;
• Transferir uma pequena alíquota para o béquer estéril;
• Pipetar 10 ml de amostra e transferir para o erlenmeyer de 100 ml;
• Completar com 90 ml de solução salina peptonada tamponada (SSPT) + neutralizante (Tween 80 a 3,0 % + lecitina a 0,3 %) (diluição 10-¹);
• Homogeneizar bem;
• Fazer a medição do pH (o ideal é estar em torno de 7,0; caso seja necessário, pingar uma gota por vez de NaOH, homogeneizar e verificar o pH até chegar no ponto ideal);
• Preparar 4 tubos com 9,0 mL de SSPT (um será a reserva);
• Pipetar 1 mL do erlenmeyer e transferir no primeiro tubo com 9,0 mL de SSPT (diluição 10-2);
• Deste tubo, pipetar 1 mL e transferir para o segundo tubo (diluição 10-3);
• Deste tubo, pipetar 1 mL e transferir para o terceiro tubo (diluição 10-4);
• Após preparadas às diluições, proceder plaqueamento conforme figura abaixo:

[pic 1]

Fonte: Adaptado de Dra. Elzíria Aguiar Nunan (Aula de Controle Microbiológico de Preparações Farmacêuticas e Cosméticas, 2018)

• Ao transferir a suspensão para a placa, verter o meio sob esta suspensão e homogeneizar fazendo movimentos em forma de “8” (antes do meio se solidificar);
• Realizar para cada diluição duas placas de ágar caseína-soja e duas placas de ágar sabouraud dextrose;
• Fazer controle negativo dos meios (duas placas de petri: uma contendo ágar caseína-soja e outra contendo ágar sabouraud dextrose);
• Incubar as placas de ágar caseína-soja entre 48 a 72 horas na temperatura de 37ºC e incubar as placas de ágar sabouraud dextrose entre 3 a 5 dias na temperatura de 25ºC.
• Realizar leitura das placas e contar o número de colônias em cada placa (somente para placas que apresentam até 250 colônias de bactérias e 100 colônias de fungos).
• Fazer os cálculos para aprovar ou não o produto.

         

RESULTADOS

Tabela de crescimento de colônias nos meios de cultura de acordo com a diluição

Agar Caseína-Soja	Agar Sabouraud Dextrose
Diluição	Número de colônias	Diluição	Número de colônias
10-2	1	10-2	0
10-3	3	10-3	1
10-4	2	10-4	3

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