Coloraçao De Gram

INTRODUÇÃO

Joachim Gram, médico bacteriologista dinamarquês. É um procedimento de

coloração diferencial, pois não cora todos os tipos de células igualmente, é

muito útil, pois classifica os tipos de célula em dois grupos: Gram positivo e

Gram negativo, de acordo com as diferenças na parede celular das bactérias.

pelo calor, com os reagentes cristal violeta, iodo, etanol e fucsina, os diferentes

tipos de bactéria reagem de modo diferente a coloração de Gram, porque

diferenças estruturais em suas paredes celulares afetam a retenção ou

liberação de uma combinação de violeta de genciana e iodo. Entre outras

diferenças, as bactérias gram-positivas tem uma parede celular mais espessa

de peptidioglicana (dissacarídeo e aminoácidos) que as bactérias gram-

negativas. Além disso, as bactérias gram-negativas contem uma camada de

(lipídios e polissacarídeo) como parte da sua parede celular.

A coloração de Gram é um dos mais importantes métodos de coloração

utilizados em laboratórios de microbiologia e de análises clínicas, sendo quase

sempre o primeiro passo para a caracterização de amostras de bactérias. A

técnica tem importância clínica uma vez que muitas das bactérias associadas a

infecções são prontamente observadas e caracterizadas como Gram-positivas

ou Gram-negativas em esfregaços de pus ou de fluidos orgânicos. Essa

informação permite ao clínico monitorar a infecção até que dados de cultura

estejam disponíveis. É possível a análise de vários esfregaços por lâmina,

o que facilita a comparação de espécimes clínicos. As lâminas podem ser

montadas de forma permanente e preservadas como documentação.

A coloração de Gram foi desenvolvida em 1884, por Hans Chistrian

Consiste no tratamento sucessivo do esfregaço bacteriano, fixado

OBJETIVO

Desenvolver habilidades para executar técnicas de preparação de

esfregaços e para o método de coloração de Gram, sabendo diferenciar e

classificar as bactérias de acordo com a coloração obtida e relacionando-as ás

composições químicas da parede celular dos mesmos, desenvolver

habilidades, também para utilizar o microscópio óptico, observando as

bactérias após a coloração de Gram.

DESENVOLVIMENTO

Materiais e utensílios:

• Lamina de vidro

• Alça de ptalina

• Conta gotas

• Microscópio óptico

• Bico de bulsin

• Cristal violeta

• Lugol

• Fucsina

• Álcool Cetona

PREPARO DE ESFREGAÇO BACTERIANO

• Colocar uma gota de solução na lamina;

• Tocar a colônia bacteriana com uma alça e homogeneizar o material

colocado na lamina;

• Distender a suspensão bacteriana com movimento elíptico que este

forma um “filme” tênuo e homogêneo (esfregaço);

• Deixar secar em temperatura ambiente

COLORAÇÃO DO ESFREGAÇO BACTERIANO PELO METODO DE

GRAM

• Cobrir o esfregaço com a solução cristal violeta por 1 minuto;

• Desprezar o corante e lavar a lamina com agua corrente;

• Cobrir o esfregaço com a solução de lugol por 1 minuto;

• Desprezar o mordente e lavar a lamina com agua corrente;

• Cobrir o esfregaço com a solução descorante por alguns segundos,

lavar a lamina com agua corrente;