Coloraçao De Gram

Introdução

A Coloração de Gram é um método criado por Christian Gram para identificar e classificaras bacterias de acordo com a espessura da parede celular e sua coloração.

Na aula prática foi realizado o experimento de coloração de Gram utilizando as metologias: esfregaço, fixação, coloração, descoloração e secagem.

Materiais Utilizados

- 2 laminas de vidro;

- 2 placas de bacterias:

1. Pink – Agar Mac Conkey;

2. Vermelha – Agar Sangue.

- Alça Bactereologica;

- Bico de Bunsen;

- Solução salina 20 %;

- Óleo de imersão;

- Corante cristal Violeta;

- Lugol;

- Álcool Cetona;

- Fuscina;

- Microscópio.

Experimento

Foi feita a identificação das laminas com as siglas MC e AS, onde MC significa Mac Conkey e AS significa Agar Sangue.

Foi ascendido o bico de Bunsen para a esterilização da alça bactereologica que sera usada para as coletas das bacterias.

Nas laminas foi inserido uma pequena quantidade de solução salina 20%.

Com a extremidade da alça bactereologica foi feita a coleta da bactéria de cada placa sendo que entre cada coleta foi realizado uma nova esterealização.

Após cada coleta foi realizado o esfregaço das bacterias nas soluções salinas 20% para honogeneizar a solução e bactéria.

As lâminas foram passadas sobre a chama do bico de Bunsen para realizar a etapa de fixação das bacterias.

Sobre as duas laminas foram seguidos os seguintes passos:

- Aplicação de algumas gotas do corante cristal violeta, após um minuto a retirada de excesso;

- Aplicação dealgumas gotas do Lugol, após um minuto a retirada do excesso;

- Logo após a retirada do exceso dos materiais corante cristal violeta e Lugol foi realizada a etapda de descoloração, onde foi aplicada 3 gotas de álcool cetona uma de cada vez até a parcial remoção do corante;

- Retirou-se o excesso de substancias das com um pouco de água;

-Por último foi aplicada a fuscina, após trinta segundos foi retirado o excesso;

- Com um papel toalha as laminas foram secadas com o maximo cuidado.

Resultado

As laminas soram colocadas no microscopio com uma gota de óleo para imersão, a lente que foi utilizada para a observação estava com o aumento maximo.

Foi observados na lamina MC bacterias gram negativas (com a coloração rosa)e a morfologia de bacilos.