Coloração De Gram

Objetivo

Coloração de lâminas pelo método Gram. O propósito foi observar bem as técnicas de coloração e melhor visualização da matéria administrada em sala de aula sobre os grupos de bactérias existentes. Observar os resultados e discutir, com base no conteúdo, as colorações apresentada.

Realizar técnicas de semeadura em meio Mac Conkey( seletivo, G - ) e Manitol( seletivo e diferencial , G +), por esgotamento do inoculo por estrias, observar os resultados dos meios.

Coloração de Gram

• Lâminas

• Bico de bunsen

• Pinça

• Cristal violeta

• Lugol (mordente)

• Fucsina

Método

• Coloração de Gram

1) Após a obtenção de um esfregaço, segurando a lâmina com uma pinça, devemos secar e fixar o esfregaço pelo calor moderado do bico de bunsen, passando a lâmina pela chama três vezes.

2) Em seguida cobrir o esfregaço com o primeiro corante: Cristal Violeta, deixando agir por um minuto. Deixar escorrer o corante, fazer uma pequena lavagem na água corrente.

3) Logo, devemos cobrir com a substância mordente (Lugol), para fixar, por um minuto. Escorrer e lavar em água corrente.

4) Fazer a descoloração com o álcool, até que este liquido não arraste mais corante. Porem, esta é uma etapa delicada. É importante não aplicar o álcool diretamente no esfregaço, aplicar na lateral da lamina e deixar escorrer. Não aplicar em excesso. Em seguida lave novamente a lâmina.

5) Aplicar o segundo corante sobre o esfregaço: Fucsina, por 30 segundos.

6) Escorrer o corante e lavar novamente com água corrente.

7) Secar a preparação com papel filtro e observar em microscópio

Resultados

• Primeira lâmina: Gram positivas (cocos) para S. aureus

Após o proceder o método de coloração de Gram, a coloração final obtida havia sido roxa, em seguida pela análise microscópica foi possível visualizar que as mesmas possuiam formato esférico(cocos) e arranjo em cachos, sendo stafilococos.

A coloração final roxa obtida permite a classificação da bactéria como Gram positivas, as quais contêm uma espessa parede celular de peptideoglicano dando às bactérias a capacidade de reter a cor arroxeada.

• Segunda lâmina: Gram negativas (bacilos) para E. coli

Foi possível observar após uma análise microscópica, que as bactérias da segunda lâmina possuíam um formato de “bastões” ( Bastonetes). E sua coloração final rosa - avermelhada permitiu-nos a classificação da bactéria como Gram negativas, as quais possuem uma fina parede celular de peptideoglicano, SEM a capacidade de reter a cor arroxeada (cristal violeta), retendo apenas a fucsina.(avermelhada).

Técnica de Semeadura – Esgotamento

• 1 placa com semeadura de bactérias Stafilococus

• 1 placa de Ágar Mc Conkey

• 1