Determinação da amilase para detecção de pancreatite

AMILASE

INTRODUÇÃO

É uma enzima que atua na digestão do amido e do glicogênio. Seus locais de produção são as glândulas salivares (Tipo S) e as células acinares do pâncreas (Tipo P), Que agem no intestino delgado.

Somente o aumento da amilase tem importância clinica. A hipermilasemia pode ser decorrente de lesões no pâncreas, como pancreatites, lesões traumáticas, dentre outras.

O teste é executado no sangue para medir a quantidade de enzima. A amilase é produzida no pâncreas, fígado, trompa de falópio e glândulas salivares, ela converte amido em glicose.

Os métodos de determinação da atividade da amilase baseiam-se em métodos colorimétrico.

OBJETIVO

Determinação da amilase para detecção da pancreatite.

MATERIAL

Vidrarias:

-Tubos de ensaio;

-Pipetas graduadas (1 e 8 ml);

-Micropipetador (20µ).

Equipamentos:

-Estante para tubos;

-Espectrofotômetro;

-Banho-maria;

-Cronômetro;

-Pêra para pipetas.

Amostra: Soro

Reagentes:

-Reativo 1;

-Reativo 2.

MÉTODO: Colorimétrico.

Ao abrir o kit verificar se todos os reativos estão presentes, se o produto está vencido, o lote e a marca. Deixar todos os reagentes atingir a temperatura ambiente. A reação é linear até 600 UA/dl, onde se exceder este valor pode ocorrer um falso resultado, tendo que diluir a amostra com solução fisiológica e repetir a reação multiplicando o resultado final por 10.

Técnica:

Identificar 2 tubos de ensaio limpos e secos como C (controle), D (desconhecido) e proceder como abaixo:

Controle Desconhecido

Reativo 1 1,0ml 1,0ml

Homogeneizar e incubar os tubos em banho-maria a 37ºC por alguns minutos. Adicionar:

Amostra - 20µ

Homogeneizar e incubar os tubos em banho-maria a 37ºC por 7 ½ minutos. Adicionar:

Reativo 2 1,0ml 1,0ml

Homogeneizar por agitação suave. Retirar do banho-maria. Adicionar:

Água destilada 8,0ml 8,0ml

Homogeneizar por inversão. Ler as absorbâncias em um comprimento de onda de 640nm, acertando o zero com água destilada.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Interferentes:

Falsos