Efeito Da Concentração De Substrato Na Atividade Da Alpha Amilase.

UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIÁS

ESCOLA DE AGRONOMIA E ENGENHARIA DE ALIMENTOS

SETOR DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS

CINÉTICA DE PROCESSOS BIOLÓGICOS

PRÁTICA 4: EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DO SUBSTRATO NA ENZIMA α-AMILASE

PROFESSOR: Gabriel Castiglioni

GRADUANDOS:

Goiânia, Outubro 2013

SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO............................................................................................. 3

2. MATERIAL E MÉTODOS........................................................................... 5

2.1 MATERIAIS ................................................................................................. 5

2.2 MÉTODOS................................................................................................... 5

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO................................................................... 6

4. CONCLUSÃO.............................................................................................. 11

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS............................................................ 12

INTRODUÇÃO

As enzimas são moléculas de proteínas que apresentam capacidade de catalisar reações químicas. São portanto, um tipo de proteína com atividade catalítica, sendo encontradas na natureza em todos os seres vivos. Sua função é viabilizar a atividade das células, quebrando moléculas ou juntando-as para formar novos compostos. A singularidade desses compostos decorre do elevado grau de especificidade ao substrato em condições moderadas, sob as quais atuam. São os catalisadores potentes. Algumas enzimas são específicas para determinado tipo de ligação química, como, por exemplo, a capacidade da α-amilase de romper unicamente as ligações α-1,4 das moléculas de amido (FURIGO, 2013).

O amido pode ser hidrolisado por duas vias diferentes, hidrólise ácida e hidrólise enzimática. A hidrólise enzimática permite maior controle da distribuição final de oligossacarídeos e é responsável pela obtenção dos mais importantes amidos modificados comercias, enquanto a hidrólise ácida é inespecífica (GONÇALVES, 2006). Os produtos resultantes da hidrólise são a glicose,maltose, e uma série de oligossacarídeos e polissacarídeos. Essa ampla faixa de hidrolisados, produzidos a partir de diferentes graus de hidrólise, é classificada em valores de “dextrose equivalente” (DE), o qual mede a quantidade de açúcar redutor presente no produto e é expresso em peso seco (CHRONAKIS, 1998).

Várias enzimas são conhecidas por hidrolisar a molécula de amido com liberação de diferentes produtos e são genericamente denominadas de amilases. Uma ação combinada dessas enzimas é requerida para hidrolisar completamente o amido em glicose (GUPTA et al., 2003).

As amilases podem ser divididas em duas categorias: as endoamilases e as exoamilases. As endoamilases hidrolisam as ligações glicosídicas ao acaso, no interior da molécula de amido liberando oligossacarídeos, enquanto as exolamilases hidrolisam as ligações glicosídicasa partir da extremidade não redutora da molécula liberando glicose ou maltose (GUPTA et al, 2003).

A α-amilase (1-4 α D-glucanglucanohidrolase, EC 3.2.1.1) está envolvida na digestão de carboidratos. Os inibidores protéicos da α-amilase são amplamente distribuí-dos em plantas, principalmente em cereais. Dentre os fatores que podem provocar alterações na atividade enzimática, a temperatura pode ser destacado como o mais importante. Para desempenhar sua função biológica, as proteínas devem estar em seus estados nativos, com suas estruturas primária, secundária, terciária e, quando for o caso, quaternária, íntegras. O calor é um dos fatores que podem destruir essa integridade, provocando o fenômeno conhecido como desnaturação protéica (AQUARONE et al, 2001).

A atividade enzimática pode ser avaliada medindo-se a velocidade de consumo do substrato ou a velocidade de aparecimento do produto. Esta atividade depende de vários fatores, tais como o tempo de reação, a concentração da enzima, a concentração do substrato, a temperatura, o pH do meio e a presença de cofatores e/ou inibidores.

Segundo Mariotto (2006) a concentração de substrato afeta a velocidade da reação catalisada por enzimas. Os estudos dos efeitos da concentração de substrato é complicado pelo fato do substrato variar durante o curso de uma reação à medida que o substrato é convertido em produto. Em um experimento cinético, a concentração de substrato é sempre muito maior que a concentração de enzimas, e se o tempo de reação é suficientemente curto, as mudanças da concentração de substrato são negligenciáveis, podendo ser considerada como uma constante.

O objetivo da aula prática foi estudar a influência e efeito da concentração de substrato na atividade da enzima α-amilase.

MATERIAL E MÉTODOS

Materiais

Banho Maria

Béquer

Erlenmeyer

Pipeta (Roni-Alzi10mL-1/10)

Micropipeta (Digipet 10-100 μL e 500 μL)

Tubos de ensaio

Bico de Bunsen

Solução tampão citrato fosfato pH 5,0 ou 0,1mM

DNS (ácido 3,5 dinitrosalicílico)

Água destilada

Termômetro de mercúrio

Grades