Enzimas E Ph

1 MATERIAL

• Enzima invertase (0,1 mg proteína/mL)

• Tampão acetato 0,05 M pH 4,7

• Sacarose 0,2 M

• Reativo: ADNS

• Pipetas graduadas de 1 e 10mL

• Tubos de ensaio

• Banho maria

• Espectrofotômetro

2 OBJETIVOS

Verificar a influência da temperatura na atividade enzimática.

3 PROCEDIMENTOS

Foram separados 5 tubos de ensaio, onde cada um recebeu respectivamente determinadas quantidades de tampão acetato, água destilada, sacarose, invertase e ADNS, com exceção do tubo 1, que não recebeu invertase. Logo após, todos os cubos, e ainda com exceção do tubo 1, foram levados à banho maria por 5 minutos, cada qual em uma determinada temperatura (Tubo 2: temperatura ambiente – 25°C; Tubo 3: 37°C; Tubo 4: 55°C; Tubo 5: 100°C).

Já aquecidos, todos os recipientes, incluindo o tubo 1, receberam a adição de ADNS, foram aquecidos à 100°C durante 5 minutos, receberam a adição novamente de água destilada, e foram logo em seguida resfriados no gelo.

Feito o resfriamento, foram lidas as absorbâncias a 540 nm.

4 RESULTADOS

A atividade enzimática pode ser influenciada por diversos fatores, tais como PH e temperatura. A maioria das enzimas devem encontrar-se em PH ótimo para obter seu bom funcionamento, a medida que o PH se afasta de seu valor ótimo, a velocidade da reação catalisada por uma determinada enzima diminui cada vez mais.

Assim como o PH, a temperatura irá favorecer a atividade enzimática até certo ponto. A temperatura irá ocasionar um aumento na energia cinética das moléculas, fazendo com que um maior número das mesmas atinjam o estado de transição (etapa em que o reagente deve passar para se transformar em produto) de forma mais rápida. A temperatura ideal para a atividade das enzimas está em torno de 50 e 55°C, quando maiores que estes valores, as enzimas em questão serão desnaturadas, perdendo sua função.

No experimento em questão, é trabalhada a invertase, enzima que catalisa a hidrólise da sacarose em seus dois monômeros constituinte, glicose e frutose, juntamente com o reativo ADNS (ácido 3,5-dinitrossalicílico).

Como resultados, observou-se que a temperatura ideal para a ação da enzima invertase foi a presente no tubo 4, sendo esta de