Microscopia e Coloração de Bactérias

INTRODUÇÃO

As bactérias podem ser observadas COM ou SEM coloração;

• SEM coloração:

• Observadas vivas
• Utilizadas para visualização de mobilidade e morfologia, divisão e formação de esporos.

• COM coloração:

• Bact. são mortas pelas interações químicas
• Células mais visíveis
• Diferencia pela afinidade distinta aos corantes

As técnicas de coloração permitem distinguir as bactérias quanto: Morfologia e características tintoriais.

ESTRUTURA

a) Morfologia: tamanho, forma e arranjo

• Tamanho: as de maior interesse medem 0,5um – 2,5um
• Forma:

Cocos: esféricas, ovais

Bacilos: bastão, bastonete

Espiral.

• Arranjos:

Pares: diplococos

Cadeias: Estrepto.

Tetrades: cúbicos

Sarcina: cubo

Cachos: Estafilos.[pic 4]

b) Características tintoriais

• Bactérias podem adquirir a coloração, sendo possível diferenciar grandes grupos.

TÉCNICAS

As técnicas para visualização na microscopia mais utilizadas são:

1) Direto sem coloração: 

Salina

Hidróxido de potássio

Exame em campo escuro

Tinta da China

2) Coloração

a) Simples: utiliza apenas um corante.

• Azul de metileno
• Cristal violeta
• Carbofucsina

b) Diferenciais: utiliza mais de um corante, além de mordente e diferenciador

Baseia-se na diferença química existente nas estruturas;

Pode separar grupos microbianos e permitir a visualização de estruturas celulares

• Separam grupos microbianos:

• Gram
• Ziehl-Neelsen

• Visualizam estruturas:

• Coloração de flagelos
• Esporos
• Cápsula

Coloração de gram

Classifica bactérias com base no tamanho, morfologia e comportamento diante dos corantes. Baseia-se na capacidade das paredes celulares de reterem o corante cristal violeta (CV), durante tratamento com etanol.

Classifica as bactérias em Gram positivas e Gram negativas

rEAGENTES DE GRAM

1) Cristal violeta: Corante primário, cora as células com cor purpura; inicialmente cora todas as bactérias.

2) Lugol: mordente: fixa o corante primário à célula formando um complexo insolúvel.

3) Etanol: descolorante, dissolve porção lipídica de Gram – removendo o CV.

4) Fucsina (Safranina): contra corante, cora as estruturas que foram descoradas[pic 5]

[pic 6]

[pic 7]