Optimización de las condiciones para la separación de proteomas séricos en pacientes diagnosticados con leucemia linfoide aguda PRE- B

OPTIMIZACIÓN DE LAS CONDICIONES PARA LA SEPARACIÓN DE PROTEOMAS SÉRICOS EN PACIENTES DIAGNOSTICADOS CON LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA PRE- B

La leucemproteomas seria linfoide aguda (LLA) es un tipo de neoplasia maligna del sistema hematopoyético que se origina por transformación de células precursoras de la línea linfoide. Este tipo de células, se caracterizan por su ilimitada capacidad de renovación, pérdida de control de la proliferación, bloqueo en la diferenciación y resistencia a la apoptosis. La LLA es un grave problema de salud pública en nuestro país y en el mundo, solo en Estados Unidos se diagnostican 4000 casos anualmente, siendo la población infantil la más afectada con una incidencia del 66.66% del total de los casos reportados. En Colombia se tiene una alta incidencia de LLA de 6/100.000 menores de 15 años (Protocolo de vigilancia de en salud pública de leucemias agudas pediátricas- Min. Protección Social, INC, INS). Los avances en los protocolos de diagnóstico y tratamiento han permitido alcanzar tasas de curación del 80%, definidas como la ausencia de la enfermedad por al menos 10 años, en países desarrollados. No obstante, en Colombia la razón incidencia/mortalidad sigue siendo muy alta comparada con EE.UU (1,3 contra 5,1, respectivamente), lo que nos muestra que la letalidad por esta enfermedad es muy alta.

Varios defectos genéticos recurrentes han sido identificados en las LLA, dentro de estos se encuentran, translocaciones cromosómicas, deleciones, amplificación génica y mutaciones puntuales. Entre las alteraciones más comunes se encuentra la formación de proteínas quiméricas como BCR-ABL, MLL-AF4, MLL-AF9, MLL-ENL, MLL-AF10, TEL-AML1, E2A-PBX1, defectos en las vías de señalización NOTCH y en genes HOX (Teitell & Pandolfi 2008). Estos tipos de daños en la LLA, generalmente tienen como blanco a genes que codifican para factores de transcripción, proteínas modificadoras de histonas, microRNAs implicados en regulación de la expresión o algún gen involucrado en una vía de señalización importante para la diferenciación, ciclo celular o apoptosis. Las alteraciones en estos genes causarán finalmente descontrol en la regulación de la expresión génica, iniciando así la transformación celular. Aunque se han detectado varias alteraciones y se conoce que se requieren de mutaciones cooperativas para inducir la aparición de este tipo de patologías, aun no son claras las vías, o secuencias de eventos que conllevan al desarrollo de esta enfermedad.

Las LLA pueden clasificarse de acuerdo a la expresión de antígenos celulares sobre las células blásticas, clasificándose en estirpe B (LLA-B) o de estirpe T (LLA-T). Las LLA-B se presentan con mayor frecuencia (80-85%) en comparación con las LLA-T (15-20%). Dentro de las LLA de estirpe B se consideran cuatro subtipos: pro-B, común, pre-B y B (Marzan et al, 2002). Las células precursoras de los linfocitos B (pre-B) son grandes células linfoides que contienen cantidades pequeñas de IgM citoplasmática (cIgM) pero no expresan inmunoglobulinas en membrana (sIg). Ya que la mayoría de los linfoblastos de la mayoría de las LLA pediátricas carecen de sIg y otros marcadores convencionales B y T, estas leucemias se consideran como LLA “pre-B”. La leucemia linfoide aguda pre-B es considerada por algunos como el subgrupo más común de las LLA (Stanulla & Schreppe 2009). Sin embargo su incidencia varía entre el 4,5 al 25% de las LLA de estirpe B en diferentes países, siendo al parecer menos común en países iberoamericanos que en países anglosajones (Marzan et al, 2002). Por esta razón y para tener una muestra homogénea, se decidió centrar este estudio exploratorio en LLA pre-B.

El diagnóstico precoz de la LLA no existe, debido a que este tipo de patología se encuentra diseminada por todo el organismo. El diagnóstico completo implica la realización de un procedimiento invasivo y doloroso, el aspirado de medula ósea. Este procedimiento requiere el empleo de anestesia general y puede ocasionar eventos adversos en los pacientes, lo cual le impide convertirse en una prueba de tamización. Por esta razón, se requiere el descubrimiento de biomarcadores y procedimientos no invasivos que permitan mejorar el diagnóstico de la LLA y que contribuyan al control de esta enfermedad

Uno de los campos que actualmente se dedican a la búsqueda de biomarcadores en cáncer es la proteómica. Este campo hace referencia a los avances tecnológicos desarrollados para el estudio del conjunto completo de proteínas expresadas por un genoma, célula, tejido u organismo. La proteómica ofrece varias ventajas comparadas con otras áreas como la genómica, al estudiar el producto funcional de los genes, así mismo puede estudiar la estabilidad, las modificaciones post-traduccionales y la interrelación de diferentes proteínas y sus roles como parte de un sistema biológico. Existen varias iniciativas internacionales centradas en proteómica del cáncer como: TheGenome Medicine Database of Japan (GeMDBJ) y otra de The Human Proteome Organization (HUPO) con el ánimo de identificar proteínas asociadas con cáncer que puedan ser biomarcadores útiles para el control de la estás enfermedades.

El suero es quizá el más crucial compartimiento de información acerca del estado de salud y enfermedad de un individuo a través del perfil de sus proteínas constituyentes. Actualmente se tiene el proyecto del proteoma sérico del cáncer que busca obtener los perfiles séricos del oncoproteoma, que puedan identificar marcadores de riesgo de desarrollar la enfermedad y marcadores de diagnóstico temprano, y pronóstico del cáncer. Varios estudios han sugerido la posible utilidad de la proteómica en el diagnóstico de cáncer de ovario, próstata, mama, hígado y páncreas. Recientemente la FDA aprobó para uso clínico la prueba OVA1, que es un ensayo basado en cinco marcadores identificados por proteómica, para medir el riesgo de cáncer de ovario en mujeres diagnosticadas con tumor de ovario.

Los resultados de los trabajos realizados hasta el momento muestran fragmentos peptídicos de proteínas comunes en los sueros de pacientes con cáncer con perfiles diferenciales de los pacientes sin cáncer. (Villanueva et al, 2009), Se postulan que los péptidos discriminantes se originan por proteólisis ex vivo por proteasas específicas y únicas de las células tumorales generando fragmentos de proteínas encargadas, por ejemplo, de la coagulación y del complemento y que este tipo de hallazgos amplifica la señal de marcadores de enfermedad activa de baja abundancia como las proteasa (Song et al, 2006.) Se espera que estos perfiles puedan servir como marcadores sustitutos para la detección y clasificación del cáncer.

Existe muy poca información disponible sobre el estudio del