Cromatografia de Pigmentos de Pimentões

1. OBJETIVOS

Extração e separação cromatográfica de pigmentos de pimentão vermelho, amarelo e verde.

1. INTRODUÇÃO

Como em uma grande variedade de frutas e vegetais, um dos principais fatores que contribuem para a coloração característica do pimentão (Capsicum annum), além da retenção dos pigmentos de clorofilas, é a sua produção de carotenóides. A classe de carotenóides que mais contribui para a coloração de pimentões amarelos e vermelhos é a dos carotenos, enquanto que nos pimentões verdes podemos destacar as xantofilas. 1, 2  Carotenóides apresentam ainda importantes funções biológicas atuando especialmente como fonte de vitamina-A ou como anti-oxidante.3,4

Constituídos pela junção de unidades isoprenóides, carotenóides apresentam usualmente grupos cíclicos, por vezes oxigenados, em suas extremidades (Figura 1). Carotenos apresentam apenas carbono e hidrogênio e sua composição, já as xantofilas são compostos oxigenados apresentando ao menos uma função hidroxi, ceto, epóxi ou acido carboxílico. 2, 4  Vale ressaltar  que a quantidade de ligações conjugadas é um fator determinante para a coloração do pimentão, pois interferem significativamente na bandas de absorção destes compostos.4 [pic 1]

Figura 1. Estruturas moleculares de alguns carotenóides encontrados em vegetais.

 Carotenóides são compostos lipossolúveis, apresentando considerável solubilidade em solventes orgânicos. 3,4 As características dos diferentes compostos pertencentes ao grupo dos carotenóides lhes confere variações em suas propriedades físico-químicas, algumas das quais podem ser estudadas envolvendo-se cromatografia. 1

  A cromatografia em camada delgada constitui-se em método de separação, análise e quantificação de espécies contidas em uma determinada mistura. Baixo custo, fácil execução em curto período de tempo e versatilidade são vantagens próprias desta tecnica.. 1,5

  Por meio desta técnica é possível observar e interpretar a diferença de solubilidade de diferentes substâncias, bem como conceitos de interações moleculares e características estruturais das mesmas.  Os diferentes componentes de uma mistura, carregados por uma fase móvel através de uma fase adsorvente estacionária, geralmente silicagel (SiO2.xH2O) ou alumina (Al2O3), sofrem diferentes deslocamentos sendo assim separados em diferentes pontos, de acordo com suas particularidades. Estes deslocamentos característicos podem ser quantificados em termos de Rf (fator de retenção) e determinados como propriedades de certa espécie. 1,5.

 

1. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

1. Materiais

• Almofariz.
• Balança Analítica.
• Béquer.
• Capilar.
• Chapa elétrica.
• Cromatofolha (5x 10 cm).
• Funil de separação.
• Pistilo.
• Proveta.
• Suporte com haste e garras.

1. Reagentes

• Acetona.
• Água Destilada.
• Hexano.
• Pimentão Vermelho, amarelo e verde.

1. PROCEDIMENTO: Extração e cromatografia de pigmentos de pimentões

Pesou-se 10 gramas de pimentões amarelo, verde e vermelho em almofariz distintos, adicionou-se 30 mL de hexano e 10 mL de acetona em cada amostra e macerou-se as mesmas, deixou-se em repouso por 30 minutos posteriormente filtrou-se as soluções.

Colocou-se os filtrados em um funil de separação e adicionou-se hexano. Posteriormente aqueceu-se o material filtrado até que reste pouco mais de 5 mL.

Preparou-se a cromatofolha 5 x 10 cm previamente recebidas pelo professor, fazendo-se um traço com grafite na base medindo-se 1 cm da base e no inicio 0,5 cm das bordas. Fez-se três pontos sobre a linha, respeitando-se certa simetria, destinando-se ás três amostras dos pimentões vermelho, amarelo e verde.

Preencheu-se um capilar para cada amostra e aplicou-se nos pontos marcados com grafites na placa. Aplicaram-se bolhas de cada amostra na placa. Após a aplicação colocou-se a placa em béquer com eluente hexano e acetona a 5% tampou-se com vidro relógio. Ao terminar a eluição, retirou-se a placa do béquer e aguardou-se a secagem.

Observou-se as posições das manchas no cromatograma e fez-se as medidas com a régua do ponto de corrida do eluente e de cada mancha a partir da linha, calculando-se o Rf de cada amostra.

1. RESULTADOS E DISCUSSÕES

A extração dos pigmentos do pimentão ocorre devido à utilização de um reagente polar (acetona) e um reagente apolar (hexano), por causa desta característica os extratos dos pimentões puderam ser dissolvidos, por haverem na solução grupos de carotenos (apolar) e outro grupo de caráter polar. Modulando-se a polaridade, o solvente orgânico pode ser extraído conseguindo-se assim os componentes desejados.

Ao se observar a fase móvel na folha cromatográfica pode-se calcular o fator de retenção, que é obtido a partir da relação da distância percorrida pelo componente da mistura (EA) e a distância percorrida pelo eluente (ET).

        Fatores de retenções dos pimentões        

Cor	EA	ET	RF
	EA1	EA2	EA3	EA4		RF1	RF2	RF3	RF4
Vermelho Amarelo	1,7 cm	2,1 cm	3,9 cm	5,0 cm	5,8 cm	0,29 cm	0,36 cm	0,67 cm	0,86 cm
1,4 cm	-	3,5 cm	5,0 cm	5,8 cm	0,24 cm	0,60 cm	0,86 cm	-
Verde	0,7 cm	-	-	-	5,8 cm	0,12 cm	-	-	-

                       Tabela 1

Segundo a bibliografia a extração feita utilizando-se hexano e acetona origina extratos que possuem os principais pigmentos dos pimentões: carotenos, criptoxantinas, capsantinas e capsorubina (Collera-Zuniga e cols., 2005). Os carotenos são hidrocarbonetos apolares, nos quais prevalecem forças de atração entre dipolos temporários. Esses hidrocarbonetos são eluídos com facilidade pela fase móvel desta forma durante a “corrida” cromatográfica, os que mais se distanciam dos pontos são estes.

...