Hplc - Cromatografia liquida de alta eficiência

LISTA DE EXERCÍCIOS HPLC

PROFA. DRA. MARIA EUGÊNIA QUEIROZ NASSUR

1) Com base nos cromatogramas ilustrados a seguir, discutir a influência da temperatura na resolução cromatográfica dos carotenoides, simetria dos picos, sinal analítico e tempo de análise.

[pic 1]

2) Discutir a mudança nos tempos de retenção das substâncias analisadas em fase reversa. Como podemos melhorar a resolução cromatográfica?

[pic 2]

Separação de álcoo benzílico (1), fenol (2), 3,4-dimetoxiacetofenona (3), benzoína (4), benzoato de etila (5), tolueno (6), 2,6-dimetoxitolueno (7), o-metoxibifenila (8).

B refere-se ao solvente orgânico Acetonitrila.

3) Explique o mecanismo de separação dos tocoferóis. Qual é a modalidade HPLC? Dadas as seguintes condições cromatográficas:

- Coluna – Hypersil SI (sílica) 100 mm comprimento x 2,1 mm diâmetro, tamanho de partícula 5 μm.

- Fase móvel – hexano + 2 % isopropanol

- Tempo de corrida – 8 minutos

- Vazão – 0,3 mL min-1

- Temperatura da coluna – 25 ºC

- Volume de injeção – 0,5 μL

- Detector – UV-DAD 295/80 nm

- Preparo da amostra – 20 g de amostra dissolvidos em 15 mL de hexano

[pic 3]

α-tocoferol: R1 = R2 = R3 = CH3                                         γ-tocoferol: R1 = H ; R2 = R3 = CH3

β-tocoferol: R1 = R3 = CH3 ; R2 = H                      δ-tocoferol: R1 = R2 = H ; R3 = CH3

4) Com base nos cromatogramas ilustrados a seguir, explique os mecanismos de separação.

[pic 4]

[pic 5]

As seguintes condições cromatográficas são as mesmas em ambos os casos, com exceção da fase móvel.

- Coluna: YMC Pack CN, partículas 5μm, poros 120 Å, dimensões 250x4,6 mm

- Vazão: 0,6 mL/min

- Temperatura: 30 ºC

- Detector: UV a 254 nm

- Volume de injeção: 3 μL (0,25mg/mL)

- Fase móvel em A: acetonitrila/água (40/60, v/v)

- Fase móvel em B: hexano/metanol/diclorometano (75/20/5, v/v/v)

5) Com base no cromatograma ilustrado a seguir, discutir o modo de separação e a ordem de eluição dos analitos. Dadas as seguintes condições cromatográficas:

- Coluna: Discovery HS C18, 5cm x 4,6mm, partículas 3μm

- Fase móvel: (A) 20mM fosfato de potássio, pH 2,8; (B) acetonitrila

- Vazão: 1,0 mL/min

- Temperatura: 35 ºC

- Detector: UV, 220 nm

- Volume de injeção: 20 μL

[pic 6]

6) Qual é o efeito do volume de injeção no perfil cromatográfico?

[pic 7]

7) Como podemos melhorar a resolução cromatográfica? Dados:

- Coluna: Lychrosorb SI 60, partículas 5 μm

- Fase móvel: éter dietílico

[pic 8]

8) Como podemos melhorar a separação cromatográfica? As seguintes condições cromatográficas foram utilizadas no processo de separação:

- Coluna: Chromspher PAH (C18), 100 x 3,0 mm (comprimento x diâmetro interno);

- Fase móvel: acetonitrila/água (70/30, v/v);

- Detector: UV a 254 nm;

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