Validação De Metodologia Analítica Para Quantificação De Amentoflavona E Agatisflavona Em Cenostigma Macrophyllum Tul (Leguminosae), Empregando Cromatografia A Líquidos De Alta Eficiência Com Detector De Arranjo De Diodos (CLAE-DAD).

Validação de metodologia analítica para quantificação de amentoflavona e agatisflavona em Cenostigma macrophyllum Tul (Leguminosae), empregando Cromatografia a Líquidos de Alta Eficiência com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD).

Silva, D.A.A.1; Santos, E.1; Alves, C.Q.1; Santos Júnior, M.C.1; Brandão, H. N.1

1 Departamento de Saúde, Universidade Estadual de Feira de Santana

Introdução: Cenostigma macrophyllum Tul (Leguminosae) conhecida popularmente no Brasil como “caneleiro” é amplamente utilizado na medicina popular contra doenças gastrointestinais. Um estudo fitoquímico identificou a presença de biflavonas e triterpenoides, nas folhas de C. macrophyllum. Sendo assim, o presente estudo visa descrever um método validado para determinação das biflavonas (amentoflavona e agatisflavona) em C. macrophyllum de acordo com as orientações da ANVISA e do INMETRO.

Parte Experimental: Amostras dos extratos clorofórmico e hidrometanólico de folhas e cascas de caule foram extraídas em cartucho SPE, filtradas em membrana de 0,22 μm e injetadas em CLAE-DAD. A separação foi realizada por meio de coluna LiChroCART Purospher Star® RP18-e (250 mm x 4,6 mm i.d.) (5µm), gradiente de eluição: ácido acético 0,7% em água (v/v- eluente A) /acetonitrila (eluente B), e lmax = 280nm.

Resultados e Discussão/Conclusão: Seletividade: Cromatogramas e espectros de UV dos padrões das biflavonas foram comparados com os obtidos dos extratos clorofórmico e hidrometanólico de folhas e cascas de caule de C. macrophyllum. Os resultados mostraram boa especificidade para o método. Linearidade: A curva de calibração mostrou linearidade satisfatória na gama analítica estudada, tanto para amentoflavona (R2 = 0,9975) quanto para agatisflavona (R2 = 0,9900). Precisão: A repetibilidade foi usada para avaliar a precisão. Três soluções de baixas, médias e altas concentrações foram injetadas em triplicata nas mesmas condições do método analítico. Os valores do Desvio Padrão Relativo (DPR%) foram todos abaixo de 2,06%, dentro do preconizado pela ANVISA. Exatidão: Foi avaliada pela técnica de recuperação do analito. Amostras dos extratos foram enriquecidas com padrões das biflavonas em três concentrações diferentes, gerando um resultado médio de recuperação de 62,5% para amentoflavona e 109,5% para agatisflavona. Os intervalos aceitáveis de recuperação para determinação da exatidão geralmente estão entre 70 e 120%. Porém, dependendo da complexidade analítica da amostra, este valor pode ser de 50 a 120%. Sendo assim, mesmo com os resultados da exatidão da amentoflavona menor que 70%, pode-se considerar que o método é exato tendo em vista a complexidade dos extratos, bem como, da substância em análise. Limites de detecção (LD) e Limites de quantificação (LQ): A partir das curvas de calibração dos padrões agatisflavona e amentoflavona foram estimados LD e LQ. Os resultados encontrados para a agatisflavona foram de LD=9,88μg/mL e LQ=29,95 μg/mL, e para a amentoflavona foram de LD=12,26 μg /mL e LQ=37,16 μg /mL. Os resultados mostram que o presente método é adequado tanto para identificação quanto para quantificação de amentoflavona e agatisflavona conforme os parâmetros estabelecidos pela ANVISA e INMETRO.

Financiamentos: CAPES, CNPQ

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