Meio de cultura

1 INTRODUÇÃO

A prática de inoculação de bactérias tem como objetivo determinar possíveis contaminações em ambientes, produtos, etc. Além do fato de determinar qual o tipo de bactéria.

Existem vários tipos de micro-organismos presentes no ar a nossa volta, esses mesmos podem ser classificados como vírus ou bactérias; o estudo de tais é importantíssimo para sociedade em diversos meios; como por exemplo: na área da saúde, da limpeza, da alimentação, agricultura, cosméticos.

As bactérias são imaculadas em um meio de cultura que pode ser líquido, sólido ou semissólido. A incubação dessas bactérias é feita em material esterelizado e em ambiente controlado tomando os devidos cuidados para que não haja contaminações e que ao fim do processo a bactéria a ser estudada seja fidedigna à amostragem.

1.1 Aparelhos e aparelhos utilizados

Preparo do meio de cultura: Erlenmeyer, Becker, bastão de vidro, placa de petri, papel, barbante, micro-ondas, autoclave, forno de Pasteur e estufa de encubação.

Amostragem: placa de petri (meio de cultura anteriormente preparado), papel e barbante.

Transferência das bactérias inoculadas: placa de petri (com as bactérias anteriormente inoculadas), placa de petri (com o meio de cultura), alça de platina, lamparina e tubo de ensaio.

Análise dos resultados: placa de petri (com as bactérias transferidas em estrias), pisseta, alça de platina, lâminas para observação, corantes e microscópio.

2 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Preparou-se em um Erlenmeyer 100 mL do meio de cultura, diluindo-o em água destilada conforme as instruções do fabricando e aquecer até ebulição. Tampou-se o Erlenmeyer e levou-se a autoclave junto com a placa de petri por 30 minutos a 120°C.

Esterelizou-se a câmara de fluxo laminar com álcool 70% e deixou-se a luz UV ligada por 30 minutos. Transferiram-se os materiais esterilizados na autoclave para a câmara de fluxo laminar. Colocou-se o meio de cultura para a placa de petri. Tampou-se, e aguardou-se sua solidificação e incubou-se invertida.

Preparou-se uma solução salina NaCl 0,85%. Esterilizaram-se os tubos de ensaio e a solução salina na autoclave por 20 minutos a 12ºC. Colocou-se 2 mL da solução salina no tubo, flambou-se a alça, pegou-se o inoculo, difundiu-se na solução.

Pegou-se uma alçada da cultura e realizaram-se as estrias. Inoculou-se invertido por 24 horas. Adicionou-se 5 mL de solução salina ao tubo. A adição ocorre próximo à chama para que não ocorra qualquer contaminação.

Figura 1 – Fonte própria

Colocou-se o esfregaço com a coloração, deixou-se por aproximadamente 15 segundos. Adicionou-se água destilada sobre o centro da lâmina coberta com a coloração e deixou-se agir por em média 45 segundos. Escorreu-se o corante lavando-o em um filete de água corrente, cobriu-se a lâmina com lugol diluído e deixou-se agir por aproximadamente 1 minuto.

Escorreu-se o lugol e lavou-se em um filete de água corrente. Adicionou-se álcool etílico sobre a lâmina, descorando-a, até que não desprendesse