Relatório de Microbiologia: Coloração de Gram

Escola de engenharia industrial metalúrgica de Volta Redonda

Universidade Federal Fluminense

Relatório de Microbiologia: Coloração de Gram

        

Alunos: Christiane Constantino de Oliveira e Douglas Reis

                                  Professor: Carlos Eduardo

 

26 de Abril de 2017, Volta Redonda-RJ.

Objetivos:

Diferenciar as bactérias entre Gram positiva e Gram negativa, pelo método de coloração. Onde nós aprendemos a preparar esfregaço de bactérias, realizar a técnica de Coloração de Gram e seus fundamentos, de modo que possamos fazer a comparação de sua cor e estrutura depois (no microscópio).

Introdução:

O mecanismo da coloração de Gram se refere à composição da parede celular, sendo que as Gram-positivas possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico, e as Gram-negativas, uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. Durante o processo de coloração, o tratamento com álcool-acetona extrai os lipídeos, daí resultando uma porosidade ou permeabilidade aumentada da parede celular das bactérias Gram-negativas.

    Assim, o complexo cristal violeta-iodo (CVI) pode ser retirado e as bactérias Gram-negativas são descoradas. A parede celular das bactérias gram-positivas, em virtude de sua composição diferente, torna-se desidratada durante o tratamento com álcool-acetona, a porosidade diminui, a permeabilidade é reduzida e o complexo CVI não pode ser extraído.

    Outra explicação baseia-se também em diferenças de permeabilidade entre os dois grupos de bactérias. Nas Gram-positivas, o complexo CVI é retido na parede após tratamento pelo álcool-acetona, o que causa, provavelmente, uma diminuição do diâmetro dos poros da camada de glicopeptídeo ou peptideoglicano da parede celular. A parede das bactérias Gram-negativas permanece com porosidade suficientemente grande, mesmo depois do tratamento com álcool acetona, possibilitando a extração do complexo CV-l.

Materiais:

• Lâminas
• Lamínulas*
• Óleo de imersão
• Bico de Bunsen- lamparina
• Alça de platina
• Solução de cristal violeta
• Lugol
• Álcool acetona
• Fucsina de Gram
• Água
• 3 Bactérias
• Microscópio
• Papel de secagem
• Conta gotas
• Cronometro

Métodos:

Primeiramente precisamos preparar esfregaços para cada uma das 3 bactérias (R,E,RE),logo após essas bactérias são transferidas para lâminas e aquecidas(com o bico ) para que sequem.

Em seguida, aplicamos a solução de cristal violeta na lamina e esperamos 30s. Sucessivamente aplicamos o lugol e aguardamos mais 30s.

Após dado o tempo, inclina-se as lâminas para que escorresse o excesso para pia e goteja-se álcool acetona até não haver mais corante sobre as mesmas, depois deve-se lavar com agua.

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