RESUMO DO QUE É BIOMOL

1. PRÁTICA - EXTRAÇÃO DE DNA de bactérias.

1. Estabilidade de sequências de DNA .(sequências ricas em A T e ricas em CG)

A e T formam 2 ligações do tipo ponte de hidrogênio. Já o C e G formam 3 ligações do tipo ponte de hidrogênio. Isso significa que a ligação entre C e G é mais estável do que uma ligação entre A e T. Portanto uma sequencia de DNA rica em ligações de C e G é mais estável do que um rica em A e T.

1. Comparar o DNA da bactéria E. coli com seus RNAs mensageiro e transportador.

O DNA da bactéria E. coli possui dupla hélice com ligações duplas de hidrogênio entre Adenina e Timina e ligações triplas de hidrogênio entre Citosina e Guanina. Um nucleotídeo se liga a outro da mesma fita através de ligações covalentes entre o grupo fosfato de um e o carbono 3 da pentose do outro. Comparativamente seus RNA´s possuem fita simples portanto não ligações entre bases, e há a mesma ligação entre os nucletídeos. Porém a Timina é substituída pela Uracila (U) nos RNA’s. Ambos os RNA’s são formados através da enzima RNA Polimerase, que nos procariotos é única para todas as classe de RNA’s, tendo como molde, genes do DNA. Os procariotos podem ter um promotor controlando mais de um gene, mas normalmente estes genes com promotor em comum têm funções semelhantes, portanto, os RNA’s mensageiro e transportador não se originaram do mesmo grupo de genes/promotor. Os genes que originam o RNA mensageiro tem informação para síntese de proteínas, enquanto os RNA transportadores são sintetizados a partir de genes com informações de transporte de moléculas de aminoácidos até os ribossomos, onde essas moléculas se unem para formar as proteínas.

1. Forquilha de replicação do DNA

A replicação de DNA sempre tem início num ponto na molécula, caracterizado por uma seq. de bases especificas denominado origem da replicação (sequencias A-T que quebradas mais facilmente por possuirem apenas 2 pontes de hidrogenio), a partir de onde a dupla fita se abre. As terminações destes são pontos dinâmicos, chamados forquilhas de replicação, onde as fitas de DNA são separadas e replicadas.Devido molécula de DNA ser muito extensa, ocorrem  diversas forquilhas de replicação ao mesmo tempo.  A replicação acontece sempre no sentido 5’ => 3’, portanto na Fita Líder a Enzima DNA Polimerase III replicará o DNA normalmente, uma vez que esta fita já está na orientação correta para tal. Porém na Fita Retardada, a orientação é a inversa (3’=>5’), pois a Enzima Helicase abre a dupla fita ao meio. Uma vez que a DNA Polimerase III precisa de uma referencia para iniciar a replicação do DNA, entra em ação uma outra enzima chamada DNA Primase, que catalisa a síntese de um pequeno fragmento de RNA, chamado de Primer sobre a cadeia molde de DNA, que atua como iniciador para a DNA Polimerase III adicionar desexirribonucleotídeos. Na Fita Líder o Primer é sintetizado apenas uma vez e depois a replicação acontece continuamente, porém na Fita Retardada ele é criado em intervalos regulares que são completados com desoxirribonucleotídeos pela DNA Polimerase III, formando assim os Fragmentos de Okazaki. Cada vez que um fragmento é completado, outro Primer é sintetizado pela DNA Primase, e a sequencia é completada pela DNA Polimerase III, sempre no sentido 5’=>3’. Conforme os fragmentos de Okazaki vão se afastando da Forquilha, uma outra enzima, a DNA Polimerase I substitui os Primers de RNA por nucleotídeos de DNA e após isso, a enzima DNA Ligase estabelece as ligações covalentes entre os nucleotídeos terminais dos fragmentos de Okazaki, terminando assim, a replicação da Fita Retardada também.

1. Princípio da técnica de Reação de Polimerização em Cadeia (PCR).

O principal proposito da PCR é fazer um numero imenso de copias de um determinado fragmento gênico. A técnica explora função natural da enzima Taq- polimerase, essa enzima é semelhante ao DNA polimerase. Os ciclos da PCR são: Fase de desnaturação, fase de anelamento e fase de extensão do DNA.

1. Processamento do RNA eucariótico .

Após a formação da sequencia líder e poliadenilação, mas antes que o RNA saia do núcleo todas as sequencias dos introns são removidas e os éxons ligados uns aos outros. O resultado é uma molécula de RNA muito menor a qual agora contem uma sequencia codificante não interrompida. Esta etapa é chamada de splicing de RNA . Os introns são removidos do RNA por enzimas compostas de proteína e de RNA. Essas enzimas que fazem o splicing são denominadas snRNP.

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