Atps De Bioquimica

Foi o botânico russo, Mikhail Tswett que inventou a primeira técnica de cromatográfica em 1900 durante suas pesquisas sobre a clorofila. Ele usou uma coluna de absorção liquida contendo carbonato de cálcio para separar pigmentos de folhas de plantas. Ele colocou uma pequena quantidade de amostra no topo de uma coluna de vidro cheia de carbonato de cálcio em pó, e então lavou a amostra com éter de petróleo. Conforme a amostra descia pela coluna, apareciam bandas separadas e de cores distintas. O método foi descrito em 30 de dezembro de 1901 no 11º Congresso de Médicos e Naturalistas em São Petersburgo. A primeira publicação aconteceu dois anos depois, em 1903. Ele utilizou pela primeira vez o termo cromatografia numa publicação em 1906 no jornal de botânica alemão. Em 1907 ele demonstrou a sua cromatografia na Sociedade Botânica Alemã.

A cromatografia é um processo de separação de componentes de uma mistura complexa baseada em diferentes critérios: adsorbilidade, solubilidade, massa molecular, carga iônica e afinidade. Os mais variados compostos de uma mistura podem ser separados desde íons complexos, até aminoácidos, peptídeos, proteínas, glicídios, lipídios, nucleotídeos, entre outros. A técnica pode ser utilizada isoladamente ou em conjunto a outros métodos instrumentais, com a finalidade de isolar, identificar e quantificar substâncias químicas.

Os métodos cromatográficos permitem separar os componentes de uma mistura, pois dependem da migração seletiva e diferencial dos solutos através de um sistema constituído de duas fases: uma estacionária (ou fixa) e outra móvel. A fase estacionária é denominada adsorvente. Adsorção é a capacidade de uma substância (o adsorvente) em deter ou concentrar seletivamente sobre a sua superfície, gases, líquidos ou sólidos, podendo ser arrastados por uma fase móvel, denominada eluente.

A cromatografia é muito utilizada para análise, separação e purificação (em pesquisa e em escala industrial) de numerosos produtos naturais: antibióticos, vitaminas, hormônios, corantes, etc. Seu uso mais conhecido, no entanto, é o da análise, localização e identificação de microgramas de substâncias em meios biológicos (exames "anti doping" e de medicina legal em geral). A cromatografia pode realizar-se numa coluna (cromatografia em coluna), ou numa tira de papel (cromatografia em papel --- nosso experimento) ou numa placa recoberta pelo material ativo (cromatografia em camada fina).

É uma técnica de análise muito versátil e com extensa e corrente aplicação em bioquímica, química analítica, etc.

 

2. MATERIAIS

- Placa de Petri

- Pipeta Graduada

- Pêra para a pipeta graduada

- Cuba para cromatografia

- Béquer 50 ml

- Papel filtro (papel reagente)

2.1 Reagentes

- Leucina

- Acido glutâmico

- Ninidrina 0,2%

 

3.