Semeadura Bacteriana

INTRODUÇÃO

A técnica de coloração de Gram recebeu este nome em homenagem ao médico dinamarquês Hans Cristian Joaquim Gram. Coloração de Gram é uma técnica para diferenciação de microorganismos através das cores, para que sejam observadas em microscópio óptico. Em meados de 1884, Hans Gram presencio que as bactérias após serem tratadas por diversos corantes, acabavam adquirindo cores diferenciadas. Classificando as Gram-positivas as que ficavam roxas e Gram-negativas as que ficavam vermelhas. A Coloração de Gram é um teste muito importante, rápido e fácil que permite aos clínicos a diferenciação entre as duas ou mais importantes classes de bactérias, ela é essencial para a taxonomia (ciência que estuda os seres vivos), e fundamental para a identificação das bactérias sendo bastante utilizada em laboratórios de bacteriologia.

MATERIAL UTILIZADO

• Solução salina

• Corantes para a coloração de Gram

• Cristal de Violeta, Lugol, Álcool-Acetona e Safranina

• Alça ou fio de platina

• Placas pré cultivadas com S. aureus

• Placas pré cultivadas com E. coli

• Óleo de imersão

• Lâminas

• Microscópios

• Alças bacteriológicas

• Estufa 37°C

TÉCNICA DE COLORAÇÃO DE GRAM

(PASSO A PASSO)

 Antes e depois de qualquer operação de semeadura primeiramente devemos realizamos a flambagem do fio de platina. Para tanto aquecemos na chama por 2 a 3 vezes. A posição correta para a flambagem da alça é que a mesma faça um ângulo de 45o em relação à mesa de trabalho. Para retirarmos o material seja para fazer um esfregaço ou para uma semeadura, esfriamos previamente a alça.

 Em uma lâmina pingamos uma pequena quantidade de solução salina estéril. As placas deverão ser abertas próximo à chama para evitar contaminação com germes do ar.

 Recolhemos uma colônia pré-cultivada com alça bacteriológica e colocamos a colônia selecionada junto à lâmina.

 Fixamos o esfregaço próximo do calor e cobrimos o esfregaço com cristal de violeta por 1 minuto.

 Retiramos o excesso de corante com um fio de agua corrente.

 Cobrimos o esfregaço com lugol por 1 minuto, retiramos novamente o excesso de corante com um fio de agua corrente.

 Descoramos com álcool acetona até removermos o excesso de corante e lavamos com um fio de agua corrente.

