Fertilização in Vitro

UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ

CENTRO DE CIÊNCIAS TECNOLÓGICAS, DA TERRA E DO MAR

CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS – ÊNFASE EM BIOTECNOLOGIA

 Implantação e Desenvolvimento da Metodologia de Fecundação in vitro de Camundongos no Laboratório de Biotecnologia da Reprodução da Univali

UNIVERSIDADE DO VALE DO ITAJAÍ

CENTRO DE CIÊNCIAS TECNOLÓGICAS, DA TERRA E DO MAR

CURSO DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS – ÊNFASE EM BIOTECNOLOGIA

 Implantação e Desenvolvimento da Metodologia de Fecundação in vitro de Camundongos no Laboratório de Biotecnologia da Reprodução da Univali

Itajaí, 10 de dezembro, 2008

SUMÁRIO

AGRADECIMENTOS        

SUMÁRIO        

LISTA DE FIGURAS        

LISTA DE TABELAS        

RESUMO        

INTRODUÇÃO        

Ciência em Animais de Laboratório        

Animais Transgênicos e Geneticamente Modificados        

Banco de Gametas        

Fecundação in vitro (FIV)        

OBJETIVOS        

Objetivo Geral        

Objetivos Específicos        

MATERIAIS E MÉTODOS        

RESULTADOS        

DISCUSSÃO        

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS        

APÊNDICE        

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LISTA DE FIGURAS

Figura 1. Oócitos degenerados obtidos em 41,9% dos experimentos, foto de microscópio invertido em aumento de 400x................................................................................................. 11

Figura 2.Oócitos não fecundados (A)  e embrião na primeira divisão celular apresentando corpúsculo polar (B), em microscópio invertido e aumento de 400x.......................................12

Figura 3. Foto de dois Blastocistos obtidos no procedimento 4,em meio IVF de fecundação e G1 de cultura,  em microscópio invertido e aumento de 400x.................................................12

Figura 4. Resultados da fecundação in vitro realizada nos 2356 oócitos das 41 rotinas realizadas..................................................................................................................................13

Figura 5. Desenvolvimento embrionário dos 171 oócitos nos quais a clivagem foi observada..................................................................................................................................13

Figura 6. Clivagem observada em cada meio de fecundação entre as 41 rotinas realizadas....15

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LISTA DE TABELAS

Tabela 1. Meios utilizados nos procedimentos...........................................................................8

Tabela 2. Resultados da Fecundação in vitro e desenvolvimento embrionário dos oócitos murinos utilizados neste experimento.......................................................................................11

Tabela 3. Fecundação e desenvolvimento embrionário nas 11 rotinas nas quais clivagem foi observada..................................................................................................................................14 

 Tabela 4. Porcentagem de utilização e clivagem dos cruzamentos entre linhagens................15

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RESUMO

A tendência à utilização de animais modelos geneticamente modificados é cada vez maior, o que aumenta a necessidade da implantação de técnicas para reproduzir estas linhagens. A fecundação in vitro é uma valiosa ferramenta para essas tecnologias, consiste na união do óvulo e do espermatozóide em um ambiente de laboratório totalmente controlado, obtendo embriões viáveis para tranferí-los a uma fêmea receptora. Neste estudo foram realizados 41 procedimentos, onde foram testados diferentes metodologias, meios, linhagens e materiais. Foram utilizados gametas de animais das linhagens SWISS-ALBINA e F1(C57bl/6 x Swiss) e 4 diferentes meios para fecundação e cultura (IVF/G1, GV, HTF e KSOM). Foi observado taxa de clivagem em apenas 11 ensaios, e no restante contaminação ou degeneração celular. O meio GV apresentou as melhores taxas de clivagem entre os ensaios que formaram embrião. Analisando as linhagens utilizadas a combinação Swiss fêmea x F1 macho se mostrou presente em 67% dos procedimentos que obtiveram divisão celuar. A formação de blastocisto foi evidenciada em apenas uma rotina totalizando 0,1% dos oócitos utilizados.

INTRODUÇÃO

Ciência em Animais de Laboratório

Linhagens de camundongos têm sido utilizadas como modelos experimentais de pesquisa biomédica desde o início do século XX (SOARES et al., 2004). O camundongo é o animal experimental mais utilizado por apresentar notáveis vantagens, tais como tamanho pequeno, fácil criação e manipulação, baixo custo de manutenção, apresentar grande diversidade genética e ter uma reprodução rápida e eficaz a qual permite a avaliação do objeto de pesquisa por diversas gerações em curto período de tempo (BARBOSA; MEDEIROS; AUGUSTO, 2006). Atualmente existem cerca de 12 mil linhagens de camundongos disponíveis para pesquisa científica (DAVISSON e TAFT, 2006), onde cada linhagem é destinada para uma área biomédica ou doença. Essa diversidade genética surgiu através de mutações espontâneas ou de técnicas recentes de manipulação genética de embriões como a transgenia (PESQUERO et al., 2007).