Grafico de introdução a espectofotometria

Universidade Federal de Alfenas. UNIFAL – MG

Campus Alfenas

Aula Prática abordando a quantificação de proteínas por espectrofotometria.

Hudily Santos

Laura Mascarenhas

Thamara Castro

Introdução à Espectrofotometria e suas aplicações

A espectrofotometria estuda a medição das grandezas relativas à emissão, à recepção e à absorção da radiação nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho. As medições são analisadas baseadas na absorção da luz por moléculas dispersas em uma solução.

A técnica é bastante utilizada na área da higiene, medicina, bioquímica, engenharia de combustíveis, monitoramento do meio ambiente e controle de qualidade de amostras. Especificamente na bioquímica, ela ajuda a compreender as disfunções metabólicas desencadeadas por alguma anomalia.

Descrição do método

O aparelho usado é o espectrofotômetro que permite a passagem de uma luz monocromática através de uma solução e mede a quantidade de luz absorvida por ela. Com o uso de um prisma é possível, através do aparelho, segregar a luz em feixes de diferentes comprimentos de onda. O que influencia a absorção de cada comprimento de onda é a natureza e a concentração da substancia, além de sua espessura que é atravessada pela luz.

Usa-se cores e concentrações padrões para que a solução em analise possa ser comparada.

Intervalos de comprimento de onda no espectro eletromagnético

Ultravioleta (não visível)	< 380
Violeta	380 - 450
Azul	450 – 500
Verde	500 – 570
Amarela	570 – 590
Alaranjada	590 – 620
Vermelha	620 – 750
Infravermelha	750 a 2.000

Resultados

Foram preparados 10 tubos que continham concentrações diferentes de Albumina Sérica Bovina (Bovine sérum albumin – Factor V). O primeiro tubo estava isento dessa concentração para que houvesse a comparação dos resultados. E estes estão evidenciados a seguir:

X	Y
Concentração (M)	Absorbância
0,00	0,000
0,20	0,012
0,40	0,019
0,80	0,039
1,20	0,051
1,60	0,072
2,00	0,098
2,40	0,112

[pic 1]

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