A DETERMINAÇÃO DA CARBOXIEMOGLOBINA

DETERMINAÇÃO DA CARBOXIEMOGLOBINA

Introdução

O monóxido de carbono (CO) é um gás resultante da combustão incompleta da matéria orgânica, sendo um risco sério para a saúde de pessoas expostas a ele. A combinação de CO e hemoglobina formam a carboxiemoglobina (COHb). Logo, a carboxihemoglobina é o indicador da exposição ao CO, e sua concentração presente no sangue de um indivíduo exposto é proporcional à concentração de CO no ambiente e ao tempo seu de exposição. Então para analisar essa exposição realizamos a determinação da carboxiemoglobina

Material

Amostra de sangue;

Solução tampão;

Solução hemolizante;

Solução redutora;

Balança analítica;

Espectrofotômetro;

Proveta;

Pipeta graduada;

Micropipeta ajustável;

Ponteiras para micropopetas;

Tubos plásticos com tampa;

Béquer;

Cubetas.

Principio do método

A metaemoglobina e a oxiemoglobina são reduzidas com ditionio de sódio considerando a não ação deste reagente sobre a carboxiemoglobina.

Método

Em um tubo de ensaio foram adicionados 5µL de sangue coletado em tubo EDTA + 6 mL de solução hemolisante, foi realizado a homogeneização por inversão e o tubo permaneceu 10 minutos em repouso. Após 10 minutos, coletou-se 200µL da solução hemolisada e foram adicionados 2,3mL de solução redutora e foi submetido a mais 10 minutos de repouso. Logo após o tempo necessário foi realizada a leitura em espectrofotômetro nas absorbâncias de 420nm e 432nm.

Resultados

Conforme os resultados obtidos após a leitura espectrofotométrica foram realizados os seguintes cálculos para determinar a % de carboxiemoglobina no sangue:

420nm: 432nm: F:

1: 1,0789 1: 0,4581 F1: 1,330

2: 1,0966 2: 0,4649 F2: 0,4787 F2-F1= 0,4787 – 1,330 = -0,8513

3: 1,4457 3: 0,4603 F3: 1,9939

AR1= 1,0789 = 2,3552 AR2= 1,0966 = 2,3588 AR3= 1,4457 = 3,1408

0,4581 0,4649 0,4603

%COHb1= 1- 3,1324 x 100 = -2,1324 x 100 = 71,1%

2,3552 x (-0,8513) – 1,9939 + 1 -2,9989

%COHb2= 1 – ( 2,3588 x 1,330) x 100 = -2,1372 x 100 = 71,2%