A DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINAS EM AMOSTRAS DE GRÃOS POR CCD

DETERMINAÇÃO DE AFLATOXINAS EM AMOSTRAS DE GRÃOS POR CCD

1) Preparação da Amostra: Moer aproximadamente cerca de 100 g da amostra no liquidificador. Em seguida, pesar 50 g da mesma, e cuidadosamente transferi-la para um erlenmeyer de 500 mL. A seguir, adicionar 250 mL de uma solução metanol:água (60:40). Agitar a mistura por 30 minutos em agitador magnético. Após esse período, deixar o sistema em repouso para decantar. Filtrar em papel filtro o líquido sobrenadante para um erlenmeyer. Colocar cerca de 150 mL do filtrado em um funil de separação e adicionar 30 mL de uma solução saturada de NaCl e 50 mL de hexano p.a. Agitar a mistura e separar a fase hexânica. Agitar a fase aquosa e adicionar 50 mL de clorofórmio. Após agitação, deixar a mistura em repouso até a separação das fases, quando, então, a fase clorofórmica deverá ser separada e recolhida em um béquer e adicionado sulfato de sódio anidro. Em seguida, filtrar a mistura em papel filtro para um cadinho de porcelana. Levar a fase clorofórmica filtrada até a secura em banho-maria. Ao resíduo da concentração, adicionar 1,0 mL de clorofórmio e a amostra estará pronta para ser aplicada na cromatoplaca.

2) CCD: Ativar a cromatoplaca em estufa a 110 ºC por 5 minutos. Em seguida, aplicar a amostra e o padrão de aflatoxina (Aflatoxina B1) em banda no ponto de aplicação. Após aplicação, colocar a placa para desenvolvimento num dos seguintes sistemas: clorofórmio/acetona/isopropanol (87:10:3, v/v); e tolueno/acetato de etila/clorofórmio/ácido fórmico (70:50:50:20). Após desenvolvimento, retirar a mesma da cuba cromatográfica, aguardar sua secagem e observar a mesma sob luz UV (λ=366 nm), evidenciando-se as manchas fluorescentes da AFB1 de cor azul. Calcular o Rf e avaliar a presença desta aflatoxina nas amostras.