As Analises Clinicas

1 – Quais são os principais objetivos das reações de polimerase em cadeia (PCR), indique exemplos de diagnóstico laboratorial que utilizam essa metodologia.

Amplificar uma única cópia ou algumas cópias de um segmento de DNA em várias ordens de grandeza, gerando milhares a milhões de cópias de uma determinada sequência de DNA. São exemplos: diagnóstico e pesquisa de agentes infecciosos; estudos genéticos; medicina forense e teste de paternidade.

2 – Quais são os elementos químicos fundamentais da reação de polimerase em cadeia (PCR)?

        Os principais ingredientes de uma reação de polimerase em cadeia são: água, DNA-alvo, Primers, Desoxinucleotídeos (dNTPs), Mg, Taq polimerase e Tampão.

3 – Qual é a função dos primers e taq polimerase para as reações de PCR?

A Taq polimerase consegue fabricar DNA somente quando lhe é dado um primer, uma sequência curta de nucleotídeos que fornece um ponto de partida para a síntese de DNA. Em uma reação de PCR, o pesquisador determina a região do DNA que será copiada, ou amplificada, pelos primers que ela ou ele escolher.

Os primers de PCR são pedaços curtos de DNA de fita simples, geralmente por volta de 202020 aminoácidos de comprimento. Dois primers são usados para cada reação de PCR, e eles são projetados de modo que englobem a região de interesse (região que deve ser copiada). Isto é, são dadas sequências que os farão se ligar a fitas opostas do DNA molde, bem nas extremidades da região a ser copiada. Os primers se ligam ao molde por pareamento de bases complementares.

4 – Como ocorre a visualização das reações de PCR em tempo real e RT PCR?

Na qPCR, o resultado é visualizado imediatamente, dispensando a eletroforese. Isto é possível pela adição de sondas fluorescentes às reações de PCR. A amplificação do DNA-alvo é monitorada durante o processo de qPCR. A medida que o DNA é amplificado, o nível de fluorescência cresce proporcionalmente.

(1) Visualização por eletroforese em gel de agarose, coradas com brometo e etídio, visualizadas por transiluminação UV;

(2) Sequenciamento dos produtos da PCR

(3) Polimorfismo no fragmento de restrição (RFLP)

(4) hibridação com probe de oligonucleotídeos espécificos e hibridação reversa.

5 – Quais os estágios clínicos e forma de transmissão da sífilis?

Estágio Primário – Ocorre cerca de 03 semanas após o contato com o indivíduo infectado, que consiste de uma única lesão eritematosa, firme, indolor e elevada (cancro);

Estágio secundário – Ocorre 02 a 10 semanas após o cancro primário, caracteriza-se por exantema difuso, nas palmas das mãos, que podem ser acompanhadas de lesões orais brancas, febre, cefaléia e artrite;    

Sífilis Terciária – Ocorre anos após a lesão primária é caracterizada por lesões inflamatórias na aorta, coração e SNC.

Sífilis latente - Não há sinais e sintomas, mas os anticorpos detectados pela sorologia para sífilis (STS) persistem. Como os sintomas da sífilis primária e secundária são ocasionalmente mínimos ou ignorados, os pacientes são, com frequência, diagnosticados na fase latente, por meio de sorologia para sífilis.

Sífilis Congênita – Ocorre durante a gestação, podendo ocasionar aborto tardio ou parto natimorto e várias complicações após o parto.  

        A sífilis é doença transmitida pela via sexual (sífilis adquirida) e verticalmente (sífilis congênita) pela placenta da mãe para o feto. O contato com as lesões contagiantes (cancro duro e lesões secundárias) pelos órgãos genitais é responsável por 95% dos casos de sífilis. Outras formas de transmissão mais raras e com menor interesse epidemiológico são por via indireta (objetos contaminados, tatuagem) e por transfusão sanguínea.

6 – Descreva os métodos laboratoriais para diagnóstico sorológico da sífilis.