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PESQUISA DE ENTEROBACTÉRIAS

Por:   •  7/6/2018  •  Relatório de pesquisa  •  2.879 Palavras (12 Páginas)  •  293 Visualizações

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3.        PESQUISA DE ENTEROBACTÉRIAS

Material

1 placa com meio de MacConkey ou EMB

2 placas com meio SS

1 placa com meio Hectoen ou Verde Brilhante

2 tubos com caldo Selenito ou Tetrationado

2 tubos com meio Tríplice Sugar Iron (TSI)

2 tubos com meio EPM

2 tubos com meio MILI

1 tubo com meio Citrato de Simmons

1 tubo com Ágar Uréia

Material para teste de fenilalanina desaminase

Material para testes complementares (se necessário)

Material para sorotipagem

Método

        Em placas contendo meio de MacConkey e SS, fazer estrias com a amostra.  Semear também em tubo com meio de Selenito (enriquecimento).  Incubar as placas e os tubos a 37o C por 18 a 24 horas.

        Se houver crescimento no tubo com meio de selenito, semear em placas com meio de SS e Hectoen ou Verde Brilante e incubar a 37o C  por 24 horas.

        Se houver crescimento nas placas com meio de MacConkey e SS anotar as características culturais nas Tabelas 4 e 5.  Retirar uma colônia, fazer coloração de Gram e anotar as características morfo-tinturiais na Tabela 3 tendo como base a Tabela 1.

        Utilizar essa colônia para a realização das provas bioquímicas.

3.1        Meio TSI

        Com o fio de platina inocular a bactéria no tubo de TSI (Tríplice-açucar-ferro) em profundidade e estrias na superfície inclinada.  Incubar 24 horas e observar o resultado com relação a utilização de glicose, sacarose e lactose e produção de H2S.  Observar a Tabela 2 e anotar o resultado das provas bioquímicas na Tabela 6.  Estas provas podem ser realizadas separadamente.

3.2        Meio MILI

        Com o fio de platina inocular a bactéria no tubo com meio MILI em profundidade.  Incubar a 37o C por 24 horas e observar o resultado com relação à motilidade, produção de indol e descarboxilação da lisina.  Obervar a Tabela 2 e anotar o resultado das provas bioquímicas na Tabela 6.  Estas provas podem ser realizadas separadamente.

3.3        Utilização de CITRATO

        Fazer estrias na superfície inclinada do tubo com meio Citrato de Simmons.  Incubar a  37o C por 24 a 48 horas.  Observar a Tabela 2 e anotar o resultado na Tabela 6.


3.4        FENILALANINA DESAMINASE

        Com a alça de platina, fazer estrias na superfície inclinada do tubo com meio Phenylalanine Ágar.  Incubar a  37o C por 18 a 24 horas.  Cobrir a superfície do ágar (4 a 5 gotas) com reativo de cloreto férrico a 10%.  Girar o tubo para que ocorra deslocamento das colônias.  Observar o resultado e anotar na Tabela 6, baseando-se na Tabela 2.

3.5        Produção de UREASE

        Estriar a superfície inclinada do tubo com Ágar Uréia e incubar a  37o C por 18 a 24 horas.  Baseado na Tabela 2 anotar o resultado na Tabela 6.

        Caso necessário, efetuar testes bioquímicos complementares e anotar na Tabela 6.  Baseado nas reações bioquímicas e nas tabelas específicas para enterobactérias, classificar a bactéria em estudo.  Efetuar a sorotipagem utilizando inicialmente soros polivalentes e a seguir monovalentes.  Anotar o resultado na Tabela 7.


Figura 1.        Sequência para pesquisa de enterobactérias.

[pic 1]

amostra[pic 2][pic 3][pic 4][pic 5][pic 6]

[pic 7]

[pic 8]

[pic 9]

MacConkey                        SS                                  Selenito[pic 10][pic 11]

[pic 12][pic 13][pic 14]

[pic 15]

[pic 16]

                37oC        18-24 h                Verde Brilhante                SS[pic 17]

                      Gram                                        37oC        24 h

                provas bioquímicas

                                                                Provas bioquímicas


Tabela 1.        Características morfo-tinturiais das enterobactérias

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Características

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morfologia                                                bacilos retos

comprimento                                                2,0 a 4,0 µm

largura                                                        0,5 a 2,0 µm

agrupamento                                                isolado

motilidade                                                variável

esporo                                                        ausente

cápsula                                                variável

Gram                                                        negativo

...

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