A Contagem de coliformes totais e termotolerantes

1. INTRODUÇÃO

Segundo Franco & Landgraf, (1996) A análise microbiológica destinada a

analisar quais e quantos microrganismos estão presentes é essencial para a percepção das

condições higiênicas em que os alimentos são preparados, os perigos em que os alimentos

podem vir a oferecer à saúde do consumidor e se o alimento terá a vida de prateleira

desejada. Esta análise também é necessária para averiguar se os padrões microbiológicos

e as especificações dos alimentos estão sendo atingidos.

De acordo com Franco & Landgraf (1996) A técnica do "número mais

provável", conhecida também como técnica dos tubos múltiplos, é outro método

amplamente utilizado pelos laboratórios de microbiologia de alimentos para calcular o

número de certos tipos de microrganismos, como coliformes, coliformes fecais, E. coli e

Staphylococcus taureus.

Conforme Siqueira, (1995) Através desta técnica, também pode-se conseguir

informações sobre a população presuntiva de coliformes, com o teste presuntivo; sobre a

população real de coliformes, com o teste confirmativo; e sobre a população de coliformes

de origem fecal.

Segundo ALMEIDA FILHO, NADER FILHO, (2002) Originárias das fezes

do homem ou animais de sangue quente, as bactérias coliformes fecais ou

termotolerantes, são caracterizadas como os principais agentes contaminantes, cuja

presença em alimentos é indicativa de contaminação de origem fecal, manifestando

péssimas condições de higiene, podendo causar diarreia e outros distúrbios intestinais.

Além de possibilitar a disseminação de outros microrganismos nocivos para a saúde, elas

são responsáveis pela deterioração não desejável do queijo, ocasionando fermentações

Afirma RITTER et al., (2001) Coliformes totais, são constituídos por

bactérias da família Enterobacteriaceae, no qual são capazes de produzir ácido e gás

através da fermentação da lactose dentro de 24-48 horas a 32-37°C. São bacilos Gram

negativos, sendo aeróbios ou anaeróbios facultativos A existência de coliformes totais e

fecais nos alimentos apontam que, as matérias-primas podem estar contaminadas, os

equipamentos utensílios empregados no momento da produção estejam mal

higienizados, ou que o manipulador não está tendo a preocupação especial em sua

higienização.

2. OBJETIVO

Contagem de Coliformes Totais e Termotolerantes em uma coxinha de

frango.

3. MATERIAIS E MÉTODOS

Material para análise:

- Coxinha de frango

Preparações da amostra e diluições seriadas:

- Diluente: 225 ml de água peptonada 0,1%

- Tubos de ensaio de diluição: 2 /9,0 mL de água peptonada/ tubo

- Pipetas: 1 pipeta automática de 1 mL

Pesou-se 25g de coxinha de frango em uma placa de Petri na balança analítica,

com o auxílio de talheres previamente esterilizados. Misturou-se a amostra no Erlenmeyer

contendo 225 ml de água peptonada 0,1%, homogeneizou-se bem e fez-se as diluições.

Teste Presuntivo:

- Meio de cultura: 9 tubos de ensaio contendo 8 mL de Caldo Lactose (CL), com tubos

de Durhan Invertidos.

- Estufa incubadora regulada a 35°C.

Da amostra de diluição 10-1, retirou-se 1mL com a pipeta, e adicionou-se ao

tubo de ensaio, que continha 9ml de água peptonada, fazendo-se a diluição 10-2. Do tubo

de ensaio de diluição 10-2, retirou-se 1ml para o tubo seguinte, fazendo-se a diluição 10-

3, também contendo 9ml de água peptonada.

Inoculação (etapa presuntiva):

Para a divisão das diluições (10-1, 10-2, 10-3), codificou-se os 9 tubos de ensaio

em 3 tubos por diluição, contendo caldo lactose (CL). Com o auxílio da pipeta fez-se a

inoculação dos tubos adicionando 1,0 mL de cada diluição correspondente aos tubos.

Incubação: Incubou-se os tubos de CL em estufa regulada a 35°C por 24 a 48 horas e

observou se existiu crescimento com produção de gás. Caso negativo, reincubar por mais

24 horas e repetir a leitura, passando para os itens subsequentes em caso de crescimento

com produção de gás.

Contagem de Coliformes Totais:

- Meio de Cultura: 9 tubos de ensaio contendo de 8 mL de Caldo Bile Verde Brilhante

(BVB) com tubos de Durhan invertidos.

Transferiu-se para tubos de caldo bile verde brilhante (BVB) uma alçada bem

carregada dos tubos de CL que apresentaram crescimento com produção de gás com

auxílio de uma alçada de platina. Incubou-se em estufa regulada a 35°C por 24-48 horas

e observou se houve crescimento com produção de gás. Anotou-se o número de tubos

positivos