A EXTRAÇÃO DE DNA E VISUALIZAÇÃO MICROSCÓPICA DE FASES 

EXTRAÇÃO DE DNA E VISUALIZAÇÃO MICROSCÓPICA DE FASES DO CICLO CELULAR

Ieda Virgínia Marques Batista – 0010257

[e-mail]

1. INTRODUÇÃO

           A estrutura das células eucariontes são complexas e estão em constante replicação, permitindo o crescimento do organismo e também sua manutenção, repondo células mortas e demais células que apresentem-se afuncionais. Entre as estruturas englobadas pela membrana plasmática da célula, está o material genético.

           O DNA é formado por um par de bases nitrogenadas, uma pentose chamada desoxirribose e um fosfato. As bases nitrogenadas podem ser classificadas de acordo com a quantidade de aneis presentes em sua constituição, como púrica (2 aneis; caso da citosina e timina) ou pirimídicas (1 anel, adenina e guanina). No modelo de dupla-hélice em que o DNA se apresenta, há uma complementação entre as duas fitas: adenina – timina e citosina – guanina.

           Para que ocorra a replicação do DNA, no modelo semiconservativo, algumas enzimas atuam, na seguinte ordem: topoisomerase, DNA helicase, DNA Polimerase, DNA ligase e DNA transferase. As duas primeiras atuam juntas na abertura da fita, rompendo as ligações; as polimerases irão agir em sentido contrário, com as respectivas bases complementares; as ligases irão de fato ligar as bases já estabelecidas pela enzima anterior e , após, as dupla de transferases irão atuar na correção dessa complementação das bases.

           No ciclo celular, a replicação do material genético vai acontecer na interfase, após, inicia-se a fase mitótica, onde DNA e citoplasma são separados entre as duas células. A interfase apresenta fase G1, S e G2. Ocorrendo crescimento e multiplicação de organelas, síntese de DNA e centrossomo, e reorganiza seu conteúdo, respectivamente.

           Na Fase M acontece a mitose e a citocinese. Como subdivisão, na mitose ocorre a prófase, metáfase, anáfase e telófase. Por fim, na citocinese ocorre a separação do citoplasma, totalizando duas células completas.

 

2. OBJETIVO

           O experimento em questão tem por objetivo a extração do material genético da cebola e posterior identificação microscópica de diferentes estágios do ciclo celular.

         

3. PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

3.1- MATERIAIS

• 1 cebola
• 50ml de detergente líquido transparente
• 5g de NaCl
• 100ml de água destilada
• 50ml de álcool etílico 99,5%

            3.2- EQUIPAMENTOS

• 2 beckers
• Faca
• Liquidificador
• Colher de sopa (15ml)
• Coador
• Proveta
• Espátula de vidro
• Forma de gelo

           3.3- MÉTODO

Foi descascada, com auxílio de uma faca para cortar as extremidades, uma cebola

inteira. Em seguida, foi levada ao liquidificador por 3 minutos até se encontrar bem triturada, com o objetivo de promover lise das células.

            Em um Becker  foi preparada a seguinte solução: adicionou-se, com auxílio da proveta, 50ml de detergente líquido transparente, 5g de NaCl e 30g de cebola já triturada (foto 1).

          O detergente teve como objetivo atuar na ruptura da bicamada fosfolipídica das células o NaCl atuou na despolarização de histonas e demais macromoléculas que possuíam carga energética. Cuidadosamente, evitando a formação de espumas, foi adicionado ao Becker I, 100ml de água destilada. Após, misturou-se todo o conteúdo, utilizando-se de uma espátula de vidro.

[pic 1][pic 2]

Foto 1                                                               Foto 2

            A solução foi levada ao banho-maria por 15 minutos (foto 2), sendo possível a inativação de enzimas presentes, por meio da desnaturação de tais proteínas. Logo após retirado do banho-maria, o Becker I foi rodeado de cubos de gelo, por 2 minutos, para que cessasse o processo de desnaturação, preservando o DNA ativo.

            O conteúdo do Becker I foi transferido para o Becker II, passando por meio de um coador, retirando a parte sólida ainda presente na solução (foto 3).

...