Meios de Cultura e Técnicas de Semeadura

1-Introdução

Meios de culturas fornecem o suporte e condições necessárias para o cultivo de micro-organismos. Os meios de cultura podem ser sólidos, semi-sólidos ou líquidos e cada meio de cultura contém quantidades e tipos de nutrientes específicos para cada micro-organismo. Alguns exemplos de meios de cultura são:

⦁ Ágar nutriente;

⦁ Caldo verde bile brilhante;

⦁ Caldo lactosado;

⦁ Ágar sangue;

⦁ Ágar Mac Conkey;

⦁ Ágar sabouraud;

⦁ Ágar PDA.

Agar Mac Conkey; Caldo lactosado e Verde Bile Brilhante nos tubos (para teste confirmativo dos tubos múltiplos). Fontes das imagens: <http://www.ebah.com.br/content/ABAAAeu6kAJ/microbiologia-ar-agua-solo> <https://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81gar_MacConkey>

Meios de cultura como o caldo verde bile brilhante são meios seletivos (inibem o desenvolvimento de um tipo de micro-organismos, favorecendo outro grupo de micro-organismos), o ágar PDA também é um meio seletivo, porém direcionado a fungos. O ágar sangue é um meio diferencial (diferencia micro-organismos que são parecidos entre si). O ágar sabouraud é ideal para identificação e isolamento de fungos e leveduras. O ágar Mac Conkey é um meio diferencial e seletivo. E por fim, o caldo lactosado e o ágar nutriente (dois meios muito usados em nossas aulas de laboratório). O caldo lactosado muito usado para enriquecimento bacteriano e identificação de coliformes (além de permitir trocas gasosas maiores) e o ágar nutriente que é relativamente simples e de fácil preparação muito usado para o plaqueamento de colônias bacterianas. [1] e [2]

O plaqueamento consiste em depositar-se cuidadosamente o meio de cultura preparado na placa de petri (tomando os cuidados requeridos, como: ambiente estéril, flambar o bico do erlenmeyer onde o meio tenha sido preparado e seu tampão antes e depois de utilizados e sempre usando os EPI’s necessários) até cobrir seu fundo e deixar que o meio solidifique. O meio de cultura do caldo lactosado deve ser colocado em um tubo de ensaio com um tubo de duran dentro (para que as trocas gasosas também possam ser vistas e alguns coliformes identificados). [3]

Fonte da imagem: <http://www.engquimicasantossp.com.br/2013/10/agar.html>

No laboratório de microbiologia devemos fazer técnicas de semeio com as amostras que serão analisadas. As técnicas de semeio também devem ser feitas em ambiente estéril; flambando os tubos antes e depois do uso; flambando, também antes e depois do uso, as alças até o rubro (esperando que as mesmas esfriem antes de serem colocadas em contato com a amostra) e sempre usando os EPI’s necessários. Uma dessas técnicas é a de estriamento (ou esgotamento) que é direcionada a bactérias aeróbias e necessária para obtenção e isolamento de culturas puras. O estriamento consiste em fazer “estrias” no meio de cultura com a amostra que está na alça de platina com a mão leve, não sobrepondo as linhas feitas no meio ou recarregando a alça com a amostra.

Fonte:<http://www.ehow.com.br/proposito-semeadura-esgotamento-placas-agar-info_244984/>

No tubo também deve ser feito tomando os mesmos cuidados e não encostando a alça nas paredes dele.

Outra técnica de semeio é a Pour Plate (também conhecida como PCA) que é direcionada principalmente a bactérias anaeróbias e é feita uma homogeneização suave do meio de cultura com a amostra na placa, com movimentos circulares e em sentido de “8”.

As técnicas de semeio também são muito importantes para o bom crescimento dos micro-organismos presentes na amostra, no meio.

2-Métodos

3-Resultados e Discussão dos Resultados

Os três meios de cultura preparados no dia 19 de maio de 2017, foram feitos com o Lactose Broth, Ágar Nutriente e Ágar Place Count. O preparo do Lactose Broth não foi satisfatório pois, sofreu contaminação de micro-organismos, devido a falta de água destilada no laboratório, para diluir e fazer o preparo correto do meio, por esse motivo esse meio de cultura foi descartado e foi utilizado outro meio de cultura de Lactose Broth.

Com o Ágar Nutriente e a amostra foram feitas 4 placas Petri, com o Ágar Place Count e a amostra foram feitas três placas Petri e com o Lactose Broth e a amostra foram feitos três tubos de ensaio.

As placas Petri e o tubo de ensaio com as amostras da água do bebedouro foram feitos dia 2 de junho de 2017, e após doze dias, no dia 14 de junho de 2017, foi observado o resultado:

Tabela 1: Resultados das placas com o Ágar Nutriente

Placa 1 Não foi possível fazê-la pois, o meio de cultura não endureceu